操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

中文名称：HMG-CoA还原酶（HMGCR）抑制剂(Mevastatin)

英文名称：Mevastatin

产品规格：1mL(10mM)|10mg|50mg

产品货号：BJ-01X7854

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

丹酚酸D

英文名：   Salvianolic acid D

英文别名：   (alphaR)-alpha-[[(2E)-3-[2-(Carboxymethyl)-3,4-dihydroxyphenyl]-1-oxo-2-propen-1-yl]oxy]-3,4-dihydroxybenzenepropanoic acid

CAS登录号：   142998-47-8

分子式：   C20H18O10

丹酚酸C

英文名：   Salvianolic acid C

英文别名：   (alphaR)-alpha-[[(2E)-3-[2-(3,4-Dihydroxyphenyl)-7-hydroxy-4-benzofuranyl]-1-oxo-2-propen-1-yl]oxy]-3,4-dihydroxybenzenepropanoic acid

CAS登录号：   115841-09-3

分子式：   C26H20O10

三七皂苷R2(R型)

CAS登录号：   新品待定

分子式：   C41H69O13

分子量：   871.01

分子结构：     

三七皂苷Ft1

CAS登录号：   新品待定

分子式：   C47H80O17

分子量：   917.13

分子结构：     

苯甲酰次乌头原碱

英文别名：   Benzoylhypaconine

CAS登录号：   63238-66-4

分子式：   C31H43NO9

分子量：   573.29

次乌头原碱

CAS登录号：   新品待定

分子式：   C24H39NO8

分子量：   469.57

分子结构：     

新乌头原碱

CAS登录号：   6792-09-2

分子式：   C24H39NO9

分子量：   485.57

分子结构：     

28-去甲基-β-香树脂酮

CAS登录号：   新品待定

分子式：   C29H46O

分子量：   410.67

分子结构：     

长春瑞滨

英文名：   Vinorelbine

英文别名：   5-Noranhydrovinblastine； NVB；Kw-2307；(2β,3β,4β,5α,12R,19α)-4-(Acetyloxy)-6,7-didehydro-15-[(2R,6R,8S)-4-ethyl-1,3,6,7,8,9-hexahydro-8-(methoxycarbonyl)-2,6-methano-2H-azecino[4,3-b]indol-8-yl]-3-hydroxy-16-methoxy-1-methyl-aspidospermidine-3-carboxylic acid, methyl ester

CAS登录号：   71486-22-1

分子式：   C45H54N4O8

长春新碱

英文别名：   22-oxo-vincaleukoblastine

CAS登录号：   57-22-7

分子式：   C46H56N4O10

分子量：   824.96

酒石酸长春质碱

英文别名：   ;(2alpha,5beta,6alpha,18beta)-3,4-Didehydroibogamine-18-carboxylic acid methyl ester (2R,3R)-2,3-dihydroxybutanedioate

CAS登录号：   4168-17-6

分子式：   C25H30N2O8

分子量：   486.51

HMG-CoA还原酶（HMGCR）抑制剂(Mevastatin)线粒体超氧化物染色试剂盒-M13  30T|50T  2 ug pFastBac1-Gus pFastBac1-Gus 低温运输，-20℃保存

内质网染色试剂盒(蓝色荧光)  125T|250T  沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）（2015药典） Sabouraud Dextrose Agar 250g

高尔基体G01绿色荧光染色试剂盒  30T  1瓶 C6细胞株 C6 低温运输和保存

溶酶体染色试剂盒(绿色荧光)-L01  250T|500T  大肠杆菌／大肠菌群显色培养基(第二代) E.Coli/Coliform Chromogenic Medium 1000(ML)

溶酶体染色试剂盒(红色荧光)-L03  500T|1000T  300U T7 DNA 聚合(未修饰) T7 DNA Polymerase（unmodified） -20℃保存

溶酶体染色试剂盒(黄色/蓝色荧光)-L05  125T|250T  500mL Phosphate Buffer，0.2M, pH6.8   Phosphate Buffer，0.2M, pH6.8   常温保存

细胞质染色试剂盒-C01  500T  0.1mL×10 BL21(DE3)pLysS化学感受态细胞 BL21 (DE3) pLysS Competent Cell -80℃保存

Ca2+钙离子染色试剂盒(Fluo-3,AM法)  50T|100T  250mL MOPS Buffer,1.0M,pH7.0   MOPS Buffer,1.0M,pH7.0   常温保存

细胞膜染色试剂盒(绿色荧光)-M01  1000T|5000T  1/2MS培养基 1/2MS Medium 250g

细胞膜染色试剂盒(橙色荧光)-M03  1000T|5000T  1瓶 U-2 OS-Luc teT-on细胞株 U-2 OS-Luc teT-on 低温运输和保存

细胞骨架染色试剂盒-C12  500T  M-肉汤 M-Broth 250g