细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

中文名称：c-Met抑制剂（EMD-1214063）

英文名称：EMD-1214063

产品规格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

产品货号：BJ-01X7851

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

乌金苷

CAS登录号：   新品待定

分子结构：     

规格：   20 mg/支

纯度：   ≥ 98%

告达亭苷元

英文名：   caudatin

英文别名：   (3beta,12beta,14beta,17alpha)-12-[[(2E)-3,4-Dimethyl-1-oxo-2-pentenyl]oxy]-3,8,14,17-tetrahydroxypregn-5-en-20-one

CAS登录号：   38395-02-7

分子式：   C28H42O7

青阳参苷元B

英文名：   Qingyangshengenin B

CAS登录号：   新品待定

分子式：   C29H44O6

分子量：   488.66

青阳参苷元A

英文名：   Qingyangshengenin A

CAS登录号：   新品待定

分子式：   C29H38O7

分子量：   498.61

决明蒽醌

英文名：   Obtusifolin

英文别名：   2,8-Dihydroxy-1-methoxy-3-methyl-9,10-anthracenedione

CAS登录号：   477-85-0

分子式：   C16H12O5

山麦冬皂苷B

英文名：   Liriopesides B

英文别名：   25(S)-ruscogenin-1-O-β-D-fucopyranoside-3-O-α-L-rhamnopyranosy

CAS登录号：   182284-68-0

分子式：   C39H62O12

3-异倒捻子素

英文别名：   3,4-dihydro-5,9-dihydroxy-8-methoxy-2,2-dimethyl-7-(3-methylbut-2-enyl)pyrano[3,2-b]xanthen-6(2H)-one

CAS登录号：   19275-46-8

分子式：   C24H26O6

分子量：   410.46

β-倒捻子素

英文名：   Beta-mangostin

英文别名：   1,6-Dihydroxy-3,7-dimethoxy-2,8-bis(3-methyl-2-butenyl)-9H-xanthen-9-one;1,6-Dihydroxy-3,7-dimethoxy-2,8-bis(3-methyl-2-buten-1-yl)-9H-xanthen-9-one

CAS登录号：   20931-37-7

分子式：   C25H28O6

梭砂贝母碱

英文名：   Hupehenine

英文别名：   Cevane-3,6-diol(3β,5α,6β,17β)

CAS登录号：   98243-57-3

分子式：   C27H45NO2

左旋肉碱

英文名：   L-carnitine

英文别名：   - CARBOXY-N,N,N-TRIMETHYL-2-PROPEN-1-AMINIUM CHLORIDE;

CAS登录号：   541-15-1

分子式：   C7H15NO3

人参皂苷CK

英文别名：   20(S)-Ginsenoside C-K；(20S)-20-(β-D-Glucopyranosyloxy)dammara-24-ene-3β,12β-diol

CAS登录号：   39262-14-1

分子式：   C36H61O8

分子量：   621.88

c-Met抑制剂（EMD-1214063）oechst 33258染色液(即用型)  10ml|50ml  20L 超快核酸电泳液干粉  SuperBuffer-2 常温

Hoechst 33342/PI双染试剂盒  100T  Apoptotic Cell Hoechst 33342/PI Detection Kit2 ug pGAPZα A pGAPZα A 低温运输，-20℃保存

Hoechst 33342染色液  10ml|50ml  肠道菌增菌液体培养基（颗粒）（2015药典）  250g

碘化丙啶PI染色试剂盒  100T  Cell Apoptosis Detection Kit(PI)1瓶 CHO细胞株 CHO 低温运输和保存

即用型DAPI染色液  10ml|50ml  L-半盐酸盐 L- Cysteine hydrochloride 0.04g/支*5

溴化乙锭EB染色试剂盒  100T  Cell Apoptosis Ethidium Bromide Detection Kit500U -DNA糖基化 Uracil DNA Glycosylase（UDG） -20℃保存

EB染色液  100T  50mL Potassium Acetate Solution(乙酸钾溶液）,1M,pH7.5   Potassium Acetate Solution,1M,pH7.5   常温保存

细胞核染料PI染色液(即用型)  10ml|50ml  10块 LB平板培养基（LB-Amp平板） LB Petri Dish 低温

死细胞核7-AAD染色试剂盒  100T  Cell Apoptosis 7-AAD Detection Kit2 ug pPIC 3.5K pPIC 3.5K 低温运输，-20℃保存

碘化丙啶  10mg|50mg|100mg  Propidium Iodide醇-双岐杆菌鉴定  20支

Propidium Iodide染色液(PI,碘化丙啶)  100T  2 ug pBMN-Z pBMN-Z 低温运输，-20℃保存