培养操作步骤 : 1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布; 2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片); 3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时; 4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中; 5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 产品参数: 中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 产品货号 | PKC激活剂(Ingenol) | Ingenol | 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg | BJ-01X8294 |
商品详细介绍: 巨大戟醇(Ingenol)是一弱性PKC激活剂,具有诱导凋亡和抗癌活性。 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! :30220-46-3 别名:(-)-Ingenol 分子量:348.43 储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
实验报告: 一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 实验要点及说明: 1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法; 2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理; 3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻; 4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率; 5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。 操作要点: 1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。 2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。 3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。 4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。 5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。 6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。 小鼠 PYGB 基因全长ORF克隆牛C反应蛋白(CRP)免疫试剂盒现货供应 小鼠 FNDC4 基因全长ORF克隆牛5羟色胺/血清素/血清胺(5HT/ST)免疫试剂盒*直销 小鼠 CKM 基因全长ORF克隆牛Ⅲ型前胶原氨基末端肽(PⅢNP)免疫试剂盒进口、组装 小鼠 ACTC1 基因全长ORF克隆牛1-磷脂酰肌醇-4,5 - 二二酯ζ1(PLCZ1)免疫试剂盒进口、分装 小鼠 PDCD2L 基因全长ORF克隆牛17羟孕酮(17-OHP)免疫试剂盒现货供应 小鼠 UBB 基因全长ORF克隆牛1,25二羟基D3(1,25 DHVD3)免疫试剂盒*直销 小鼠 CTSL 基因全长ORF克隆绵羊组胺(HIS)免疫试剂盒进口、分装 小鼠 COX8B 基因全长ORF克隆绵羊肿瘤坏死因子α(TNF-α)免疫试剂盒现货供应 小鼠 MRPL12 基因全长ORF克隆绵羊中性粒细胞明胶相关脂质运载蛋白(NGAL)免疫试剂盒*直销 小鼠 COX7A2L 基因全长ORF克隆绵羊脂联素(ADIPOQ)免疫试剂盒进口、组装 小鼠 ATP5J2 基因全长ORF克隆绵羊孕酮受体(PGR)免疫试剂盒进口、分装 PKC激活剂(Ingenol)亚硝酸还原酶(NiR)测试盒(可见分光光度法) 50管/24样 2 ug pGN pGN 低温运输,-20℃保存 NO含量测试盒(微量法) 100管/48样 50T 伯氏疏螺旋体PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存 NO含量测试盒(可见分光光度法) 50管/24样 1mL SDS-PAGE上样液,5× SDS-PAGE Loading Buffer,5× -20℃保存 水土中亚硝酸盐含量测试盒(微量法) 100管/48样 2 ug pXJ pXJ 低温运输,-20℃保存 水土中亚硝酸盐含量测试盒(可见分光光度法) 50管/48样 10次 血液mtDNAout 食品中亚硝酸盐含量测试盒(微量法) 100管/96样 2 ug pET-Dsb pET-Dsb 低温运输,-20℃保存 食品中亚硝酸盐含量测试盒(可见分光光度法) 50管/48样 Half–Fraser培养基 Half-Fraser Medium 250g 植物硝态氮测试盒(微量法) 100管/96样 500g 酵母粉 Yeast Extract,Powder 室温保存 植物硝态氮测试盒(可见分光光度法) 50管/48样 1000支 10 μL RNase-free白吸头(袋装带芯长尖) 常温 植物氨态氮测试盒(微量法) 100管/96样 50 T 活性氧(羟自由基)测试盒(比色法) Oxidative Stress Detection Kit 常温保存 植物氨态氮测试盒(可见分光光度法) 50管/48样 250mL MES Buffer,1.0M,pH8.0 MES Buffer,1.0M,pH8.0 常温保存
|