中文名称：M2亚基抑制剂(Triapine)

英文名称：Triapine

产品规格：1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg

产品货号：BJ-01X7849

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

盐酸去氢骆驼蓬碱

英文名：   Harmine hydrochloride

英文别名：   (3，4-b)indole,7-methoxy-1-methyl-9h-pyrido(monohydrochloride

CAS登录号：   343-27-1

分子式：   C13H13ClN2O

1-咖啡酰奎宁酸

英文别名：   1-[[3-(3,4-dihydroxyphenyl)-1-oxo-2-propen-1-yl]oxy]-3,4,5-trihydroxy-,(1a,3R,4a,5R)

CAS登录号：   1241-87-8

分子式：   C16H18O9

分子量：   354.31

柴胡皂苷B

英文名：   Saikosaponin B

CAS登录号：   新品待定

分子结构：     

外观：   白色粉末

丹参酮IIA-磺酸钠

CAS登录号：   69659-80-9

分子式：   C19H17O6S.Na

分子量：   396.39

分子结构：     

王不留行黄酮苷

英文名：   Vaccarin

英文别名：   6-(2-O-alpha-L-Arabinopyranosyl-beta-D-glucopyranosyl)-2-[4-(beta-D-glucopyranosyloxy)phenyl]-5,7-dihydroxy-4H-1-benzopyran-4-one

CAS登录号：   53452-16-7

分子式：   C32H38O19

绞股蓝皂苷

英文名：   Stevenleaf

CAS登录号：   94987-08-3

分子结构：     

外观：   浅黄色粉末

延胡索乙素

英文名：   Tetrahydropalmatine

英文别名：   (D,L)-TETRAHYDROPALMATINE HYDROCHLORIDE

CAS登录号：   6024-85-7

分子式：   C21H26ClNO4

五味子醇乙

CAS登录号：   58546-54-6

分子式：   C23H28O7

分子量：   416.47

分子结构：     

续随二萜醇

CAS登录号：   新品待定

分子结构：     

规格：   20 mg/支

纯度：   ≥ 98%

(R型)人参皂苷Rh1

英文名：   20(R)Ginsenoside Rh1

英文别名：   3β,12β,20β-Trihydroxy-5α-dammar-24-en-6α-yl β-D-glucopyranoside

CAS登录号：   新品待定

分子式：   C35H60O9

(R型)人参皂苷Rh2

英文名：   （R）Ginsenoside Rh2

英文别名：   (3beta,12beta)-12,20-dihydroxydammar-24-en-3-yl beta-d-glucopyranoside

CAS登录号：   112246-15-8

分子式：   C36H62O8

M2亚基抑制剂(Triapine)高尔基体绿色荧光探针  200μg  GolgiGreen2 ug pCAMBIA2330 pCAMBIA2330 低温运输，-20℃保存

茜素红染色试剂盒(ph8.3)  10ml  Mordant Red 3纤维二糖-（CC）琼脂 Cellobiose-polymyxin E Agar 250g

溶酶体蓝色荧光探针  200μL  LysoBlue10g  Indole  室温保存

神经元示踪剂—核黄  10mg  Nuclear Yellow(Hoechst S769121)50T 链球菌B族PCR检测试剂盒   低温运输，-20℃保存

尼氏小体染色液  100ml  Nissl body Staining Solution5mL 黑色素细胞生长因子-不含TPA Growth Factor For Cell Culture -20℃保存

刚果红(β-淀粉样蛋白染料)  10mg  250mL Beta-ME-EDTA Solution（beta-EDTA溶液）  Beta-ME-EDTA Solution  常温保存

神经元绿色荧光探针  10mg  NeuroGreen1.5mL miRNA尿素-PAGE上样液,6× miRNAoN -20℃保存

高氯酸化物[神经元红色荧光探针][DiIC12(3)]  10mg  NeuroRed2 ug pGCsi/H1/Neo SHGFP pGCsi/H1/Neo SHGFP 低温运输，-20℃保存

羰化青DiI(神经元示踪剂)  10mg  抗生素检定培养基8号 Antibiotic Agar NO.8 250g

微丝绿色荧光探针  200μL  Actin-Tracker Green1瓶 Cyc-Tag(S49)细胞株 Cyc-Tag(S49) 低温运输和保存

细胞骨架蓝色荧光探针  200μL  CIN-1琼脂平板（9cm） CIN-1 Agar 10个/包

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)