操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

中文名称：HSP90抑制剂(BIIB021)

英文名称：BIIB021

产品规格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

产品货号：BJ-01X7847

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

甲基辛弗林盐酸盐

英文名：   4-hydroxyephedrine hydrochloride

英文别名：   DL-1-(4-Hydroxyphenyl)-2-methyl-2-methylaminoethanol hydrochloride

CAS登录号：   7437-54-9

分子式：   C10H16ClNO2

异泽兰黄素

英文名：   Eupatilin

英文别名：   2-(3,4-Dimethoxyphenyl)-5,7-dihydroxy-6-methoxychromen-4-one

CAS登录号：   22368-21-4

分子式：   C18H16O7

棕矢车菊素

英文别名：   5,7-dihydroxy-2-(4-hydroxy-3-methoxy-phenyl)-6-methoxy-chromen-4-one

CAS登录号：   18085-97-7

分子式：   C17H14O7

分子量：   330.29

芹菜苷

英文名：   Apioside

英文别名：   7-[(2-O-D-apio-beta-D-furanosyl-beta-D-glucopyranosyl)oxy]-5-hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-4H-1-benzopyran-4-one

CAS登录号：   26544-34-3

分子式：   C26H28O14

异芒果苷

英文名：   Isomangiferin

英文别名：   4-D-Glucopyranosyl-1,3,6,7-tetrahydroxy-9H-xanthen-9-one

CAS登录号：   24699-16-9

分子式：   C19H18O11

甜茶苷

英文名：   Rubusoside

英文别名：   );(4alpha)-13-(beta-D-Glucopyranosyloxy)kaur-16-en-18-oic acid beta-D-glucopyranosyl ester

CAS登录号：   64849-39-4

分子式：   C32H50O13

七叶皂苷B

英文名：   Escin IB

英文别名：   Aescin IB；22α-(Acetyloxy)-16α,24,28-trihydroxy-21β-[[(Z)-2-methyl-1-oxo-2-butenyl]oxy]oleana-12-ene-3β-yl 4-O-[2-O-(β-D-gluco-hexopyranosyl)-β-D-gluco-hexopyranosyl]-β-D-gluco-hexopyranosiduronic acid

CAS登录号：   26339-90-2

分子式：   C55H86O24

七叶皂苷A

英文名：   Escin IA

英文别名：   Aescin IA

CAS登录号：   123748-68-5

分子式：   C55H86O24

土槿皮甲酸

英文名：   Pseudolaric acid A

英文别名：   (2E,4E)-5-[(3R,4S,4aS,9aR)-4a-(Acetyloxy)-3,4,4a,5,6,9-hexahydro-3,7-dimethyl-1-oxo-1H-4,9a-ethanocyclohepta[c]pyran-3-yl]-2-methyl-2,4-pentadienoic acid

CAS登录号：   82508-32-5

分子式：   C22H28O6

大豆皂苷Bb

英文名：   Soyasaponin BB

英文别名：   Soyasaponin I

CAS登录号：   51330-27-9

分子式：   C48H78O18

单咖啡酰洒石酸

英文别名：   (2R,3R)-2-[[(E)-3-(3,4-Dihydroxyphenyl)-1-oxo-2-propenyl]oxy]-3-hydroxybutanedioic acid

CAS登录号：   67879-58-7

分子式：   C13H12O9

分子量：   312.23

HSP90抑制剂(BIIB021)革兰氏染液  100T  500U 限制性内切MboI Restriction Endonuclease -20℃保存

碱性磷酸酶染液(偶氮偶联法，适用于细胞样本)  可染20-30张片  cALP Stain Kit1kit Protein Coupling Kit   Protein Coupling Kit   常温保存

吉姆萨染色液  100ml  Giemsa Stain Solution1个 暗盒（8×10英寸） Cassette 室温

活细胞核染料(红)  500μL  100mL 甲酰胺 Formamide     4℃保存

核转位分析试剂盒(单分子转位)(FM法)  100T  50T 钩端螺旋体PCR检测试剂盒   低温运输，-20℃保存

核转位分析试剂盒(双分子/多波长转位)(HCS法)  100T  100mg AMPPD AMPPD 4℃保存

线粒体细胞核转位分析试剂盒(HCS法)  100T  2 ug T-Rex system T-Rex system 低温运输，-20℃保存

PluronicF-127  1g  10g 酸洗玻璃珠(直径：200μm)  常温

抗酒石酸酸性磷酸酶染液  20T  2 ug pAcAd5 CMVK-NpA  pAcAd5 CMVK-NpA  低温运输，-20℃保存

快速瑞氏染液  250ml×3  含TSA平板  9cm*10/包

瑞氏-姬姆萨复合染液  250ml×3  1瓶 BGC-803细胞株 BGC-803 低温运输和保存