操作规程 1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时. 2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。 3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。 4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。 7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。 8、结果分析 a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90) 中文名称:HSP90抑制剂(BIIB021) 英文名称:BIIB021 产品规格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg 产品货号:BJ-01X7847 BIIB021是一种可全合成的HSP90抑制剂,Ki值和EC50值分别为1.7nM和38nM。 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! :848695-25-0 别名:CNF2024 纯度:99.62% 分子量:318.76 储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1) 准备F-12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。 2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。 二. 细胞处理: 1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

细胞培养方法: 1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化; ③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止; ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清; ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基; ⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。 2、细胞复苏: ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。 ②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。 3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化; ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞; ④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。 甲基辛弗林盐酸盐 英文名: 4-hydroxyephedrine hydrochloride 英文别名: DL-1-(4-Hydroxyphenyl)-2-methyl-2-methylaminoethanol hydrochloride CAS登录号: 7437-54-9 分子式: C10H16ClNO2 异泽兰黄素 英文名: Eupatilin 英文别名: 2-(3,4-Dimethoxyphenyl)-5,7-dihydroxy-6-methoxychromen-4-one CAS登录号: 22368-21-4 分子式: C18H16O7 棕矢车菊素 英文别名: 5,7-dihydroxy-2-(4-hydroxy-3-methoxy-phenyl)-6-methoxy-chromen-4-one CAS登录号: 18085-97-7 分子式: C17H14O7 分子量: 330.29 芹菜苷 英文名: Apioside 英文别名: 7-[(2-O-D-apio-beta-D-furanosyl-beta-D-glucopyranosyl)oxy]-5-hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-4H-1-benzopyran-4-one CAS登录号: 26544-34-3 分子式: C26H28O14 异芒果苷 英文名: Isomangiferin 英文别名: 4-D-Glucopyranosyl-1,3,6,7-tetrahydroxy-9H-xanthen-9-one CAS登录号: 24699-16-9 分子式: C19H18O11 甜茶苷 英文名: Rubusoside 英文别名: );(4alpha)-13-(beta-D-Glucopyranosyloxy)kaur-16-en-18-oic acid beta-D-glucopyranosyl ester CAS登录号: 64849-39-4 分子式: C32H50O13 七叶皂苷B 英文名: Escin IB 英文别名: Aescin IB;22α-(Acetyloxy)-16α,24,28-trihydroxy-21β-[[(Z)-2-methyl-1-oxo-2-butenyl]oxy]oleana-12-ene-3β-yl 4-O-[2-O-(β-D-gluco-hexopyranosyl)-β-D-gluco-hexopyranosyl]-β-D-gluco-hexopyranosiduronic acid CAS登录号: 26339-90-2 分子式: C55H86O24 七叶皂苷A 英文名: Escin IA 英文别名: Aescin IA CAS登录号: 123748-68-5 分子式: C55H86O24 土槿皮甲酸 英文名: Pseudolaric acid A 英文别名: (2E,4E)-5-[(3R,4S,4aS,9aR)-4a-(Acetyloxy)-3,4,4a,5,6,9-hexahydro-3,7-dimethyl-1-oxo-1H-4,9a-ethanocyclohepta[c]pyran-3-yl]-2-methyl-2,4-pentadienoic acid CAS登录号: 82508-32-5 分子式: C22H28O6 大豆皂苷Bb 英文名: Soyasaponin BB 英文别名: Soyasaponin I CAS登录号: 51330-27-9 分子式: C48H78O18 单咖啡酰洒石酸 英文别名: (2R,3R)-2-[[(E)-3-(3,4-Dihydroxyphenyl)-1-oxo-2-propenyl]oxy]-3-hydroxybutanedioic acid CAS登录号: 67879-58-7 分子式: C13H12O9 分子量: 312.23 HSP90抑制剂(BIIB021)革兰氏染液 100T 500U 限制性内切MboI Restriction Endonuclease -20℃保存 碱性磷酸酶染液(偶氮偶联法,适用于细胞样本) 可染20-30张片 cALP Stain Kit1kit Protein Coupling Kit Protein Coupling Kit 常温保存 吉姆萨染色液 100ml Giemsa Stain Solution1个 暗盒(8×10英寸) Cassette 室温 活细胞核染料(红) 500μL 100mL 甲酰胺 Formamide 4℃保存 核转位分析试剂盒(单分子转位)(FM法) 100T 50T 钩端螺旋体PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存 核转位分析试剂盒(双分子/多波长转位)(HCS法) 100T 100mg AMPPD AMPPD 4℃保存 线粒体细胞核转位分析试剂盒(HCS法) 100T 2 ug T-Rex system T-Rex system 低温运输,-20℃保存 PluronicF-127 1g 10g 酸洗玻璃珠(直径:200μm) 常温 抗酒石酸酸性磷酸酶染液 20T 2 ug pAcAd5 CMVK-NpA pAcAd5 CMVK-NpA 低温运输,-20℃保存 快速瑞氏染液 250ml×3 含TSA平板 9cm*10/包 瑞氏-姬姆萨复合染液 250ml×3 1瓶 BGC-803细胞株 BGC-803 低温运输和保存
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