细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1) 准备F-12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。 2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。 二. 细胞处理: 1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。 中文名称:SMO抑制剂(MK-4101) 英文名称:MK-4101 产品规格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg 产品货号:BJ-01X8563 MK-4101是Hedgehog信号通路中强的SMO抑制剂,能够很好地对抗成神经管细胞瘤和基底细胞癌。 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! :935273-79-3 纯度:98.13% 分子量:493.47 储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
细胞培养方法: 1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化; ③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止; ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清; ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基; ⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。 2、细胞复苏: ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。 ②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。 3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化; ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞; ④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。 操作规程 1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时. 2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。 3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。 4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。 7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。 8、结果分析 a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90) 小鼠 CCL20 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签细胞凝血(THROMBIN)活性比色法定量检测试剂盒 20次 小鼠 bFGF 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签组织凝血(THROMBIN)活性比色法定量检测试剂盒 20次 小鼠 bFGF 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带FLAG标签血液凝血(THROMBIN)活性荧光定量检测试剂盒 20次 人 SIX1 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带His标签细胞凝血(THROMBIN)活性荧光定量检测试剂盒 20次 人 EIF4EBP2 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带His标签组织凝血(THROMBIN)活性荧光定量检测试剂盒 20次 人 SRPX2 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带FLAG标签C1-ESTERASE 人 HLA-A 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签ACTIVATED PC 人 HLA-A 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带FLAG标签LEUCOCYTE ELASTASE 人 IL17Rb 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签PLASMIN STREPTOKINASE COMPLEX 人 PCSK2 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带His标签PROTEIN S 人 PGA4 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签PROTHROMBINASE INDUCED CLOTTING TIME;PiCT SMO抑制剂(MK-4101)CENPT 着丝粒蛋白T抗体 规格: 0.2ml phospho-CAMK2G (Ter286) 磷酸化钙/钙调素依赖蛋白激CAMK2G抗体 规格: 0.1ml Rabbit Anti-human IgM/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647标记的兔抗人IgM 规格: 0.1ml OAT-1/SLC22A6 阴离子转运蛋白-1抗体 规格: 0.1ml HSPβ7/cvHSP 热休克蛋白β7抗体 规格: 0.2ml PMVK 磷酸甲羟戊酸激抗体 规格: 0.1ml Mouse Anti-human IgM/PE-CY5 PE-CY5标记的小鼠抗人IgM 规格: 0.1ml NR2C2/TAK1 孤儿核受体TAK1抗体 0.1ml Phospho-Estrogen Receptor alpha (Ser167) 磷酸化雌激素受体ER alpha 抗体 规格: 0.1mlCD167b/DDR2 盘状结构域受体蛋白2抗体 规格: 0.2ml Phospho-SHP2/SHIP2(Tyr81) 磷酸化蛋白酪磷酸2抗体 规格: 0.1ml Glypican 5 磷脂酰基醇蛋白聚糖-5抗体 规格: 0.2ml
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