培养操作步骤 ：

1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 

产品参数：

商品详细介绍：

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

实验要点及说明：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；

2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；

3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；

4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；

5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

操作要点：

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。

2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。

4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。

5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。

6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

瓜子金皂苷己

英文名：   Polygalasaponin F

CAS登录号：   882664-74-6

分子式：   C53H86O23

分子量：   1090.24

柳穿鱼黄素

英文别名：   5,7-dihydroxy-6-methoxy-2-(4-methoxyphenyl)-4-benzopyrone

CAS登录号：   520-12-7

分子式：   C17H14O6

分子量：   314.29

7-乙氧基莫诺苷

英文名：   7-O-ethyl-morroniside

CAS登录号：   新品待定

分子式：   C21H34O11

分子量：   462.49

山茱萸新苷I

英文名：   Cornuside I

英文别名：   Methyl (2R,3S,4R)-3-ethenyl-4-[2-(3,4,5-trihydroxybenzoyl)oxyethyl]-2-[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,4-dihydro-2H-pyran-5-carboxylate

CAS登录号：   131189-57-6

分子式：   C34H50O20

去乙酰基车叶草苷酸

英文别名：   (1S,4aS,5S,7aS)-1-(b-D-Glucopyranosyloxy)-1,4a,5,7a-tetrahydro-5-hydroxy-7-(hydroxymethyl)cyclopenta[c]pyran-4-carboxylic acid

CAS登录号：   14259-55-3

分子式：   C16H22O11

分子量：   390.34

鞣花酸

英文名：   Ellagic acid

英文别名：   （4,3-cde）(1)benzopyran-5,10-dione,2,3,7,8-tetrahydroxy-(1)benzopyrano

CAS登录号：   476-66-4

分子式：   C14H6O8

酯蟾毒配基

英文名：   Resibufogenin

英文别名：   14,15-beta-epoxy-3-beta-hydroxy-5-beta-bufa-20,22-dienolide

CAS登录号：   465-39-4

分子式：   C24H32O4

华蟾毒精

英文名：   Cinobufagin

英文别名：   16-beta)-bet;22-dienolide,16-(acetyloxy)-14,15-epoxy-3-hydroxy-,(3-beta,5-beta,15-bufa-2

CAS登录号：   470-37-1

分子式：   C26H34O6

二十八烷醇

英文名：   Octacosanol

英文别名：   1-Octacosanol, n-Octacosanol

CAS登录号：   557-61-9

分子式：   C28H58O

1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖

英文别名：   1,2,3,4,6-penta-O-galloy-β-D-glucose

CAS登录号：   14937-32-7

分子式：   C41H32O26

分子量：   940.68

小檗胺

英文别名：   (4aS,16aR)-3,4,4a,5,16a,17,18,19-Octahydro-21,22,26-trimethoxy-4,17-dimethyl-16H-1,24:6,9-dietheno-11,15-metheno-2H-pyrido[2',3':17,18][1,11]dioxacycloicosino[2,3,4-ij]isoquinoline-12-ol

CAS登录号：   478-61-5

分子式：   C37H40N2O6

分子量：   608.72

Aurora抑制剂(PF-03814735)细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒  >100次  Senescence β-Galactosidase Staining Kit2 ug pcDNA3.1（+）/GFP Hsp70 pcDNA3.1（+）/GFP Hsp70 低温运输，-20℃保存

溶酶体β-半乳糖苷酶染色试剂盒  >100次  Lysosomal β-Galactosidase Staining Kit马铃薯葡萄糖琼脂（含） Potato Dextrose Agar（Chloramphenicol） 250

细胞膜红色荧光探针(DiI)  10mg  DiIC18(3)50g D-  D-Pantothenic Acid Hemicalcium Salt 4℃避光保存

细胞膜绿色荧光探针(DiO)  10mg  DiOC18(3)气单胞菌培养基基础 Aeromonas Medium Base(Ryan) 250g

内质网红色荧光探针  20μl  Endoplasmic Reticulum Tracker Red5mL 支气道上皮细胞生长因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存

高尔基体红色荧光探针  1mg  Golgi Body Tracker Red100mL Bicine Buffer，0.5M,pH9.0   Bicine Buffer，0.5M,pH9.0   常温保存

溶酶体红色荧光探针  50μl  Lysosome Tracker Red50次 DNA电泳分子量标准(φX174 DNA/Hinc Ⅱ) DNAMETER（3） 4℃保存

线粒体绿色荧光探针  50μg  Mitochondria Tracker Green2 ug pGEX-4T-1-DsRed2 pGEX-4T-1-DsRed2 低温运输，-20℃保存

伊红染色液  100ml  Eosin Staining Solution猪支原体培养基 Pig Mycoplasma Base 250g

中性红染色液(活细胞染色用)  100ml  Neutral Red Staining Solution(Living cell staining)1瓶 GLC-82 [GLC82]细胞株 GLC-82 [GLC82] 低温运输和保存

瑞氏染液  250ml  Bolton肉汤添加剂 Bolton Broth Supplement 1ml/支*5