细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

中文名称：B-Raf抑制剂(HG6-64-1)

英文名称：HG6-64-1

产品规格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

产品货号：BJ-01X7845

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

棉酚

英文名：   Gossypol

英文别名：   2,2’-bis(1,6,7-trihydroxy-3-methyl-5-isopropyl-8-aldehydonaphthalene)

CAS登录号：   303-45-7

分子式：   C30H30O8

总大豆皂苷B

CAS登录号：   新品待定

分子式：   （见结构式图）

分子量：   （见结构式图）

分子结构：     

荭草素-2"-0-B-L半乳糖苷

英文名：   2"-O-beta-L-galactopyranosylorientin

英文别名：   2-(3,4-Dihydroxyphenyl)-8-(2-O-beta-L-galactopyranosyl-beta-D-glucopyranosyl)-5,7-dihydroxy-4H-1-Benzopyran-4-one

CAS登录号：   861691-37-4

分子式：   C27H30O16

七叶皂苷D

英文名：   AescinIIB

英文别名：   ESCIN IIB

CAS登录号：   219944-46-4

分子式：   C55H86O24

七叶皂苷C

英文名：   Aescin IIA

英文别名：   Escin IIA

CAS登录号：   158732-55-9

分子式：   C55H83O24

土槿皮丙酸

英文名：   Pseudolaric Acid C

CAS登录号：   82601-41-0

分子式：   C21H26O7

分子量：   390.43

土槿皮乙酸-葡萄糖苷

英文名：   Pseudolaric acid B-O-β-D-glucopyranoside

CAS登录号：   新品待定

分子式：   C29H38O13

分子量：   594.60

土槿皮甲酸-葡萄糖苷

英文名：   Pseudolaric acid A-O-β-D-glucopyranoside

CAS登录号：   新品待定

分子式：   C28H38O11

分子量：   550.59

大豆皂苷Ba

英文名：   Soyasaponin Ba

英文别名：   Soyasaponin V

CAS登录号：   114590-20-4

分子式：   C48H78O19

赛门苷I

英文名：   Siamenoside I

英文别名：   (3beta,9beta,10alpha,11alpha,24R)-3-(beta-D-Glucopyranosyloxy)-11,25-dihydroxy-9-methyl-19-norlanost-5-en-24-yl O-beta-D-glucopyranosyl-(1-2)-O-[beta-D-glucopyranosyl-(1-6)]-beta-D-glucopyranoside

CAS登录号：   126105-12-2

分子式：   C54H92O24

11-0-罗汉果苷V

英文名：   11-oxo-mogroside V

英文别名：   (24R)-3β-[6-O-(β-D-Glucopyranosyl)-β-D-glucopyranosyloxy]-24-[2-O,6-O-bis(β-D-glucopyranosyl)-β-D-glucopyranosyloxy]25-hydroxycucurbita-5-ene-11-one

CAS登录号：   126105-11-1

分子式：   C60H100O29

B-Raf抑制剂(HG6-64-1)Masson三色染色试剂盒  6×100mL  Masson Staining Kit500mL Blotto in TBS   Blotto in TBS   常温保存

姬姆萨染色液(吉姆萨染液)  250mL  Giemsa Staining Solution1g 分子生物学级糖原干粉 Glycogen Powder 常温

0.5%焦油紫染色液  50mL  Tar purple Staining Solution2 ug pGL4.30[Luc2P/NFAT-RE/Hygro] pGL4.30[Luc2P/NFAT-RE/Hygro] 低温运输，-20℃保存

苏木素染色液(Gill法)  15mL  Hematoxylin Staining Solution煌绿琼脂培养基 Brilliant Green Agar Medium 250g

Bielschowsky改良法神经组织染色试剂盒  5×50mL  Modified Bielschowsky nerve Staining Kit1瓶 HCCLM3细胞株 HCCLM3 低温运输和保存

改良型天狼猩红染色试剂盒  100mL  Enhanced Sirius Red Straining Kit10次 百万碱基级真菌DNAout  

糖原PAS染色液(真菌专用)  3×50mL  Glycogen PAS stain (for fungi)500U Tth 核酸内切 IV Tth Endonuclease IV -20℃保存

甲基绿染色液  100ml  Methyl Green Staining Solution250mL RIPA Buffer—2  RIPA Buffer—2  常温保存

尼氏染色液(Nissl染色液)  100ml  Nissl Staining Solution1 管 DH10B大肠杆菌 DH10B E.coli Strain -80℃保存

甲基绿-派洛宁染色液(MGP染色液)  100ml  Methyl Green-Pyronin Staining Solution2 ug pREV pREV 低温运输，-20℃保存

棉蓝乳酚油染色液  250mL  Lactic Acid Phenol Cotton Blue Staining SolutionO157菌成套生化鉴定管  11种*1套/盒*10盒