培养操作步骤 : 1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布; 2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片); 3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时; 4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中; 5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 产品参数: 中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 产品货号 | 多靶点激酶抑制剂(KW-2449) | KW-2449 | 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg | BJ-01X7946 |
商品详细介绍: KW-2449是多靶点激酶抑制剂,对FLT3,ABL,ABLT315I和Aurora kinase的IC50值分别为6.6,14,4和48nM. 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! :1000669-72-6 纯度:99.85% 分子量:332.4 储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
实验报告: 一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
实验要点及说明: 1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法; 2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理; 3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻; 4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率; 5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。 操作要点: 1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。 2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。 3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。 4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。 5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。 6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。 人 SKP2 基因全长ORF克隆小鼠骨成型蛋白7(BMP-7)免疫试剂盒进口、分装 人 ARRB2 基因全长ORF克隆小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)免疫试剂盒现货供应 人 ERP44 基因全长ORF克隆小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)免疫试剂盒*直销 人 CKM 基因全长ORF克隆小鼠骨成型蛋白15(BMP-15)免疫试剂盒进口、组装 人 H2AFY 基因全长ORF克隆小鼠骨保护素(OPG)免疫试剂盒进口、分装 人 MAGEA10 基因全长ORF克隆小鼠甘肽过氧化(GSH-Px)免疫试剂盒现货供应 人 PPIG 基因全长ORF克隆小鼠谷脱羧自身抗体IgM(GAD-Ab-IgM)免疫试剂盒*直销 人 DTNBP1 基因全长ORF克隆小鼠谷脱羧自身抗体IgG(GAD-Ab-IgG)免疫试剂盒进口、组装 人 FANK1 基因全长ORF克隆小鼠谷脱氢(GDH/GLDH)免疫试剂盒进口、分装 人 ARFIP2 基因全长ORF克隆小鼠孤腓肽(OFQ/N)免疫试剂盒现货供应 人 MRPL44 基因全长ORF克隆小鼠钩端螺旋体IgG(Lep IgG)免疫试剂盒*直销 多靶点激酶抑制剂(KW-2449)核转运受体importin-β抑制剂(Importazole) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg|200mg Importazole10次 百万碱基级血液DNAout Kif15驱动蛋白抑制剂(Kif15-IN-1) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg Kif15-IN-12 ug pEF1/myc-His C pEF1/myc-His C 低温运输,-20℃保存 IRS-1/2抑制剂(NT157) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg NT157改良番茄汁培养基 Tomato Juice Agar,Modified 250g BTK抑制剂(Evobrutinib) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg Evobrutinib5g β- 硫代酸 TBA(2-Thiobarbituric Acid) 密封干燥保存 p38抑制剂(SCIO-469) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg SCIO-46950T 粘附性大肠杆菌PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存 USP2抑制剂(ML364) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg ML3645mL CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂盒 Cell Counting Kit-8 4℃避光保存一年有效,-20℃避光保存两年有效 HSP90抑制剂(Debio 0932) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg Debio 0932500mL Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH3.5 Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH3.5 常温保存 exportin-1抑制剂(KPT-8602) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg KPT-860210次 DNA Shuffing试剂盒 DNA Shuffling Kit -20℃保存 PSD95抑制剂(Tat-NR2B9c) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg Tat-NR2B9c2 ug pLV-EBFP2-nuc pLV-EBFP2-nuc 低温运输,-20℃保存 ALK抑制剂(NVP-TAE 684) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg NVP-TAE 68410%NaCl卵黄乳液 5ml*10支 睾酮5α-还原酶抑制剂(Finasteride) 1mL(10mM)|100mg|200mg Finasteride1瓶 NCI-H209细胞株 NCI-H209 低温运输和保存
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