培养操作步骤 : 1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布; 2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片); 3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时; 4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中; 5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 产品参数: 中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 产品货号 | Rad6抑制剂(TZ9) | TZ9 | 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg | BJ-01X8122 |
商品详细介绍: TZ9是泛素结合酶(E2enzyme)Rad6新型抑制剂,抑制MDA-MB-231细胞增殖的IC50值约为6uM。 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! :1002789-86-7 分子量:366.33 储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
实验报告: 一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 实验要点及说明: 1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法; 2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理; 3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻; 4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率; 5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。 操作要点: 1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。 2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。 3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。 4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。 5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。 6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。 人 BARX1 基因全长ORF克隆人可溶性弹性蛋白片段(sELAF)免疫试剂盒进口、组装 人 NRG4 基因全长ORF克隆人可溶性补体激活产物SC5b9 免疫试剂盒进口、分装 人 MARK3 基因全长ORF克隆人可溶性白介素7受体(sIL-7R)免疫试剂盒现货供应 人 PROS1 基因全长ORF克隆人可溶性P选择素(sP-selectin)免疫试剂盒*直销 人 AFP 基因全长ORF克隆人可溶性OX40L(sOX40L)免疫试剂盒进口、组装 人 XRCC6 基因全长ORF克隆人可溶性Endoglin(sENG/sCD105)免疫试剂盒进口、分装 人 KRT6A 基因全长ORF克隆人可溶性CD86(B7-2/sCD86)免疫试剂盒现货供应 人 ADCK4 基因全长ORF克隆人可溶性CD80(sCD80)免疫试剂盒*直销 人 CHRNA3 基因全长ORF克隆人可溶性CD44变体9(sCD44-v9)免疫试剂盒进口、组装 人 TNFRSF21 基因全长ORF克隆人可溶性CD40配体(sCD40L)免疫试剂盒进口、分装 人 OLFM2 基因全长ORF克隆人可溶性CD40免疫试剂盒现货供应 Rad6抑制剂(TZ9)JAK3抑制剂((3S,4S)-Tofacitinib) 1mL(10mM)|5mg (3S,4S)-Tofacitinib1g 庚烷磺酸钠 1-Heptanesulfonic Acid Sodium Salt 密封干燥保存 COX-2抑制剂(Propyphenazone) 1mL(10mM)|250mg Propyphenazone50T 柯萨奇病毒PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存 组胺受体抑制剂(Levodropropizine) 1mL(10mM)|50mg|100mg Levodropropizine500 mL HT筛选培养基 Cell Culture Medium -20℃保存 核苷酸类似物逆转录酶抑制剂 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg Mutagenic Impurity of Tenofovir Disoproxil250mL Acetate Buffer(乙酸缓冲液),1M,pH5.5 Acetate Buffer,1M,pH5.5 常温保存 IRAK4抑制剂(IRAK inhibitor 4 trans) 1mL(10mM)|2mg|5mg IRAK inhibitor 4 trans30次 一站式DNA非变性PAGE电泳套装 One-Stop DNA Native PAGE Pack 常温 MAGL抑制剂(KML29) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg KML292 ug pGAPZ C pGAPZ C 低温运输,-20℃保存 PPAR激动剂(Saroglitazar Magnesium) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg|50mg Saroglitazar Magnesium木糖赖脱氧胆酸盐琼脂培养基(2015药典) 250g GPR119激动剂(APD597) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg APD5971瓶 CHO-K1细胞株 CHO-K1 低温运输和保存 LXR激动剂(BMS-779788) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg BMS-779788亚硫酸铋琼脂平板(9cm) Bismuth Sulfite Agar 10个/包 PDHK抑制剂(AZD7545) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg AZD754580U 8-氧代DNA糖基化 OGG1(8-Oxoguanine DNA Glycosylase) -20℃保存 ω/ω-1羟化酶和CYP11B1抑制剂(Metyrapone) 1mL(10mM)|500mg Metyrapone5mL Ribonuclease A Solution, 10mg/mL Ribonuclease A Solution, 10mg/mL 常温保存
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