操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

中文名称：PI3K γ和δ抑制剂（TG100-115）

英文名称：TG100-115

产品规格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

产品货号：BJ-01X7842

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

延胡索甲素

英文别名：   2,3,9,10-tetramethoxy-13-alpha-methyl-13a-beta-berbin

CAS登录号：   518-69-4

分子式：   C22H27NO4

分子量：   369．44

芫花素

英文名：   Genkwanin

英文别名：   4H-Benzopyran-4-one

CAS登录号：   437-64-9

分子式：   C16H12O5

野黄芩素

英文名：   Scutellarein

英文别名：   4',5,6,7-Tetrahydroxyflavone; 5,6,7-Trihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-4H-chromen-4-one

CAS登录号：   529-53-3

分子式：   C15H10O6

乔松素

英文名：   Pinocembrin

英文别名：   (s)-2,3-dihydro-5,7-dihydroxy-2-phenyl-4h-1-benzopyran-4-one

CAS登录号：   480-39-7

分子式：   C15H12O4

反式茴香脑

英文别名：   (E)-1-METHOXY-4-(1-PROPENYL)BENZENE

CAS登录号：   104-46-1

分子式：   C10H12O

分子量：   148.2

3, 6′-二芥子酰基蔗糖

英文别名：   DISS

CAS登录号：   新品待定

分子式：   C34H42O19

分子量：   754.68

人参皂苷Rk1

英文名：   Ginsenoside Rk1

英文别名：   3β,12β-dihydroxydammar-20(21),24-diene-3-O-β-D-glucopyranosyl(1→2)-β-D-glucopyranoside

CAS登录号：   新品待定

分子式：   C42H70O12

人参皂苷Rg6

英文名：   Ginsenoside Rg6

英文别名：   [dammar-20（21），24-diene-3β，6α，12β-trihydroxy-6-O-α-L-rhamnopyranosyl（-1→2）-β-D-glucopyranoside]

CAS登录号：   新品待定

分子式：   C42H70O12

罗汉果苷III

英文名：   Mogroside III

CAS登录号：   130567-83-8

分子式：   C48H82O19

分子量：   963.15

罗汉果苷VI

英文名：   Mogroside VI

CAS登录号：   89590-98-7

分子式：   C66H112O34

分子量：   1449.58

表儿茶素

英文名：   Epicatechin

英文别名：   CIS-2-[3,4-DIHYDROXYPHENYL]-3,4-DIHYDRO-2H-1-BENZOPYRAN-3,5,7-TRIOL

CAS登录号：   490-46-0

分子式：   C15H14O6

PI3K γ和δ抑制剂（TG100-115）Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒  20次/50次/100次  Cell proliferation and toxicity detection kit1 g  Metformin （LKB1-AMPK激活剂） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存

Tunel细胞凋亡检测试剂盒（FITC）  10次/20次/50次  Tunel cell apoptosis detection kit（FITC）100mL CAPSO Buffer,0.2M,pH9.5  CAPSO Buffer,0.2M,pH9.5  常温保存

转染试剂  0.75ml/1ml/1.5ml  100 mL F12培养基（含10%胎牛血清） Cell Culture Medium -20℃保存

细胞周期与凋亡检测试剂盒  50次/200次/500次  2 ug pGRE-Luc pGRE-Luc 低温运输，-20℃保存

高保真KOD试剂盒  50U/200U/1000U  培养基R Medium R (Lactose monohydrate sulphite medium) 250g

细胞增殖与毒性检测试剂盒（CCK-8）  100次/500次/3000次/10000次  1瓶 HMy2.CIR细胞株 HMy2.CIR 低温运输和保存

线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1法)  50T|100T  单料缓冲蛋白胨水管  10ml*20支

线粒体膜电位检测试剂盒(JC-10法)  100T  1mg 二硫键异构，人 Disulfide Isomerase -70℃保存

Caspase-8活性测定试剂盒  20T|50T|100T  Caspase-8 Activity colorimetric assay Kit125mL Sodium Acetate Solution（乙酸钠溶液）,3M,pH7.0   Sodium Acetate Solution,3M,pH7.0   常温保存

Caspase-6活性测定试剂盒  20T|50T|100T  Caspase-6 Activity colorimetric assay Kit1 管 Rosetta(DE5)大肠杆菌  

Caspase-5活性测定试剂盒  20T|50T|100T  Caspase-5 Activity colorimetric assay Kit2 ug pRSET B pRSET B 低温运输，-20℃保存