细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

中文名称：BCRP抑制剂（YHO-13177）

英文名称：YHO-13177

产品规格：1mL(10mM)|5mg|10mg

产品货号：BJ-01X8121

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

人 ARAF 基因全长ORF克隆人克拉拉细胞蛋白(CC16)免疫试剂盒进口、分装

人 KIF1B 基因全长ORF克隆人可溶性转铁蛋白受体(sTfR)免疫试剂盒现货供应

人 SEMA3B 基因全长ORF克隆人可溶性肿瘤坏死因子受体2(sTNF-R2)免疫试剂盒*直销

人 LCMT2 基因全长ORF克隆人可溶性血小板内皮细胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)免疫试剂盒进口、组装

人 PAK4 基因全长ORF克隆人可溶性血纤蛋白单体复合物(SFMC)免疫试剂盒进口、分装

人 ORAI1 基因全长ORF克隆人可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)免疫试剂盒现货供应

人 WNT5B 基因全长ORF克隆人可溶性胸苷激1(TK1)免疫试剂盒*直销

人 ARC 基因全长ORF克隆人可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(sLOX-1)免疫试剂盒进口、组装

人 COQ7 基因全长ORF克隆人可溶性间皮素相关肽(SMRP)免疫试剂盒进口、分装

人 CXCL3 基因全长ORF克隆人可溶性核因子κB受体活化因子(sRANK)免疫试剂盒现货供应

人 EPAS1 基因全长ORF克隆人可溶性淀粉前体蛋白α(sAPPα)免疫试剂盒*直销

BCRP抑制剂（YHO-13177）人重组MAO-A抑制剂(CR4056)  1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg  CR40562 ug pGC-Ctr pGC-Ctr 低温运输，-20℃保存

NLRP3抑制剂(CY-09)  1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg  CY-091000次 改良Lowry法蛋白定量试剂盒 Enhanced Lowry Assay Kit 常温保存，BSA标准需要-20℃保存

MD2抑制剂(MD2-IN-1)  1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg  MD2-IN-11瓶 CW-2细胞株 CW-2 低温运输和保存

MAP4K4抑制剂(PF-06260933)  1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg  PF-06260933NA平板（加）（9cm） Nutrient Agar 10个/包

S1P1激动剂(AKP-11)  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  AKP-1110U 无机焦（酵母） Pyrophosphatase, Inorganic(yeast) -20℃保存

TNF-α诱导抑制剂(Hispidol)  1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg  Hispidol500mL PIPES Buffered Saline，5X,pH6.5  PIPES Buffered Saline，5X,pH6.5  常温保存

细胞因子释放抑制剂(AX-024)  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg  AX-0241mL 可溶性B溶液,20mg/mL Amphotericin B Solution -20℃避光保存

COX抑制剂（Zaltoprofen）  1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg  Zaltoprofen2 ug pPICZα GB pPICZα GB 低温运输，-20℃保存

PDE4B抑制剂  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg  GSK256066 2,2,2-trifluoroacetic acid乳酸菌成套生化鉴定管  11种/盒*5

血小板粘附抑制剂（Limaprost）  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg  Limaprost2 ug pC-GoldyTALEN pC-GoldyTALEN 低温运输，-20℃保存

p38MAPK抑制剂(SD-06)  1mL(10mM)|5mg  SD-06100次 即用型易错PCR试剂盒 Instant Error-Prone PCR Kit -20℃保存