操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

中文名称：EZH2抑制剂(EI1)

英文名称：EI1

产品规格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

产品货号：BJ-01X7841

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

Khasianine

英文别名：   o-α-L-rhamnopyranosyl-(1 → 4 glu)-O-(3)-β-D-glucopyranosyl solasadine

CAS登录号：   32449-98-2

分子式：   C39H63NO10

分子量：   705.92

银椴苷

英文名：   Tiliroside

英文别名：   1-O-[5,7-Dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-4-oxo-4H-1-benzopyran-3-yl]-β-D-glucopyranose 6-[3-(4-hydroxyphenyl)propenoate];2-(4-Hydroxyphenyl)-3-[6-O-[3-(4-hydroxyphenyl)acryloyl]-β-D-glucopyranosyloxy]-5,7-dihydroxy-4H-1-benzopyran-4-one

CAS登录号：   20316-62-5

分子式：   C30H26O13

夏佛塔苷

英文名：   Schaftoside

英文别名：   8-(α-L-Arabinopyranosyl)-6-(β-D-glucopyranosyl)-5,7-dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-4H-1-benzopyran-4-one

CAS登录号：   51938-32-0

分子式：   C26H28O14

女贞苷

英文名：   Ligustroflavone

英文别名：   7-[(O-6-Deoxy-alpha-L-mannopyranosyl-(1->2)-O-[6-deoxy-alpha-L-mannopyranosyl-(1->6)]-beta-D-glucopyranosyl)oxy]-5-hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)- 4H-1-benzopyran-4-one

CAS登录号：   260413-62-5

分子式：   C33H40O18

大黄酸-8-O-β-D-葡萄糖苷

英文名：   Rhein-8-O-β-D-glucopyranoside

CAS登录号：   113443-70-2

分子式：   C21H18O11

分子量：   446.36

L-茶氨酸

英文名：   L-Theanine

英文别名：   L-GLUTAMIC ACID GAMMA-(ETHYLAMIDE)

CAS登录号：   3081-61-6

分子式：   C7H14N2O3

喹乙醇

英文名：   Olaquindox

英文别名：   2-(n-(2-hydroxyethyl)karbamoyl)-3-methylchinoxalin-1,4-dioxid

CAS登录号：   23696-28-8

分子式：   C12H13N3O4

去亚甲基小檗碱

英文别名：   Dibenzo[a,g]quinolizinium,5,6-dihydro-2,3-dihydroxy-9,10-dimethoxy

CAS登录号：   25459-91-0

分子式：   C19H18NO4

分子量：   324.35

欧夹竹桃苷

英文名：   Oleandrin

英文别名：   (3-beta,5-beta,16-beta)-hexopyranosyl)oxy)-14-hydroxy

CAS登录号：   465-16-7

分子式：   C32H48O9

小檗红碱

英文别名：   9-Berberoline

CAS登录号：   15401-69-1

分子式：   C19H15NO4

分子量：   321.33

脱氢紫堇碱

英文名：   Dehydrocorydaline

英文别名：   13-Methyl-2,3,9,10-tetramethoxy-5,6-dihydrodibenzo[a,g]quinolizinium

CAS登录号：   30045-16-0

分子式：   C22H24NO4

EZH2抑制剂(EI1)PKH67/PI双染细胞毒性检测试剂盒  500T  1瓶 L615细胞株 L615 低温运输和保存

CFSE/PI双染细胞毒性检测试剂盒  500T  采样产品系列  

PKH67细胞增殖与毒性检测试剂盒  500T  10mg 中性亲和素蛋白 Nuetral Avidin -20℃保存

PKH26细胞增殖与毒性检测试剂盒  500T  250mL Sodium Chloride Solution（氯化钠溶液），5M  Sodium Chloride Solution，5M  常温保存

细菌活性检测试剂盒-CCK8  250T|500T|1000T  25U 碱性，大肠杆菌 Alkaline Phosphatase，E.coli -20℃保存

细菌活性检测试剂盒-AlamarBlue  250T|500T|1000T  2 ug pSFV1 pSFV1 低温运输，-20℃保存

酵母活性检测试剂盒-AlamarBlue  250T|500T|1000T  50次 柱式真菌RNAout Column Fungal RNAOUT 4℃保存

CFSE细胞增殖与毒性检测试剂盒  500T  2 ug pCL1 pCL1 低温运输，-20℃保存

细胞活性检测试剂盒-绿色荧光  500T|1000T  菌种培养基 Strain Medium(for B.Cereus) 250g

CCK-8反应终止液  500T|1000T  25g 橙黄G钠 Orange G 室温保存

细胞周期检测试剂盒  20T|50T|100T  50T 犬瘟热病毒RT-PCR检测试剂盒  低温运输，-20℃保存