操作规程 1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时. 2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。 3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。 4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。 7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。 8、结果分析 a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90) 中文名称:凋亡信号调节激酶1(ASK1)抑制剂(NQDI-1) 英文名称:NQDI-1 产品规格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg 产品货号:BJ-01X7899 NQDI-1抑制凋亡信号调节激酶1(ASK1),Ki值为500nM. 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! :175026-96-7 纯度:98.04% 分子量:319.31 储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1) 准备F-12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。 2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。 二. 细胞处理: 1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
细胞培养方法: 1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化; ③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止; ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清; ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基; ⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。 2、细胞复苏: ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。 ②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。 3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化; ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞; ④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。 人 TAPBPL 基因全长ORF克隆小鼠胰岛素自身抗体(IAA)免疫试剂盒*直销 人 RASSF9 基因全长ORF克隆小鼠胰岛素原(PI)免疫试剂盒进口、组装 人 CCBL1 基因全长ORF克隆小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白6(IGFBP-6)免疫试剂盒进口、分装 人 NDE1 基因全长ORF克隆小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)免疫试剂盒现货供应 人 ACOT8 基因全长ORF克隆小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)免疫试剂盒*直销 人 OR10W1 基因全长ORF克隆小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP-2)免疫试剂盒进口、组装 人 RAB40A 基因全长ORF克隆小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)免疫试剂盒进口、分装 人 SFTPA2 基因全长ORF克隆小鼠胰岛素样生长因子2(IGF-2)免疫试剂盒现货供应 人 GSTT2 基因全长ORF克隆小鼠胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)免疫试剂盒*直销 人 SPACA3 基因全长ORF克隆小鼠胰岛素样生长因子1(IGF-1)免疫试剂盒进口、组装 人 INSL6 基因全长ORF克隆小鼠胰岛素受体β(ISR-β)免疫试剂盒进口、分装 凋亡信号调节激酶1(ASK1)抑制剂(NQDI-1)微管聚合抑制剂 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg Vincristine sulfate50T 大豆NOS/SS PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存 Eph receptor抑制剂(ALW-II-41-27) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg ALW-II-41-2710次 预染蛋白质电泳分子量标准(43-200 KD) Prestained Protein Marker -20℃保存 KRASG12C抑制剂(ARS-853) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg|50mg ARS-8532 ug pYFP-Tublin pYFP-Tublin 低温运输,-20℃保存 CYP17抑制剂 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg|1g|2g|5g Abiraterone acetate5次 中提柱式BAC DNAout Midi Column BAC DNAOUT 常温保存(RNase A溶液4℃保存) Bcl-xL/Bcl-2/Bcl-w抑制剂 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg ABT-7372 ug pET-30a(+) pET-30a(+) 低温运输,-20℃保存 Chk1抑制剂(LY2606368) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg LY2606368250mL 动物DNAout Animal DNAOUT 常温 Akt磷酸化激活剂(SC79) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg SC791瓶 801-D细胞株 801-D 低温运输和保存 BTK抑制剂(Acalabrutinib) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg Acalabrutinib硫乙醇酸盐流体培养基颗粒 Thioglycollate Medium 300ml/袋*10 caspase-3抑制剂(Z-DEVD-FMK) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg Z-DEVD-FMK100次 总SOD活性检测试剂盒(NBT法) Oxidative Stress Detection Kit 常温保存 热休克蛋白90抑制剂(Ganetespib) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg HSP90 Inhibitor250ML MES Lysis Buffer with NP-40 MES Lysis Buffer with NP-40 常温保存 ALK抑制剂(LDK378) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg LDK378100次 转ESPES基因植物PCR Mix (35S-EPSES 基因) Plant DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存
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