细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1) 准备F-12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。 2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。 二. 细胞处理: 1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。 中文名称:BRD9BD抑制剂(BI-9564) 英文名称:BI-9564 产品规格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg 产品货号:BJ-01X7975 BI-9564是一种选择性的,细胞透过的BRD9BD抑制剂,对BRD9的Kd值为5.9nM,对BET家族的IC50值>100μM。 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! :1883429-22-8 纯度:99.55% 分子量:353.41 储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
细胞培养方法: 1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化; ③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止; ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清; ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基; ⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。 2、细胞复苏: ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。 ②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。 3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化; ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞; ④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。 操作规程 1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时. 2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。 3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。 4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。 7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。 8、结果分析 a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90) 人 PIPOX 基因全长ORF克隆小鼠8异前列腺素(8-iso-PG)免疫试剂盒进口、组装 人 MIIP 基因全长ORF克隆小鼠8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)免疫试剂盒进口、分装 人 UBXN6 基因全长ORF克隆小鼠6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)免疫试剂盒现货供应 人 VASP 基因全长ORF克隆小鼠6酮前列腺素(6-K-PG)免疫试剂盒*直销 人 CBX6 基因全长ORF克隆小鼠5羟色胺受体2A(5-HTR 2A)免疫试剂盒进口、组装 人 AIPL1 基因全长ORF克隆小鼠5羟色胺(5-HT)免疫试剂盒进口、分装 人 SAV1 基因全长ORF克隆小鼠5羟基乙酸(5-HIAA)免疫试剂盒现货供应 人 ATP6V1C2 基因全长ORF克隆小鼠5羟二十碳四烯酸(5-HETE)免疫试剂盒*直销 人 ADAP2 基因全长ORF克隆小鼠5核苷酸(5-NT)免疫试剂盒进口、组装 人 B3GALT4 基因全长ORF克隆小鼠Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)免疫试剂盒进口、分装 人 PEX14 基因全长ORF克隆小鼠4-羟基壬烯酸(HNE)免疫试剂盒现货供应 BRD9BD抑制剂(BI-9564)Hsp90抑制剂(PU-WS13) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg PU-WS132 ug pMETα C pMETα C 低温运输,-20℃保存 KDM5抑制剂(KDM5-IN-1) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg KDM5-IN-1牛肉浸粉 Beef Extract Powder 250g CDK4抑制剂(ON123300) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg ON1233001瓶 SK-BR-3细胞株 SK-BR-3 低温运输和保存 K-Ras(G12C)抑制剂(K-Ras(G12C) inhibitor 12) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg K-Ras(G12C) inhibitor 12普通肉汤培养基 Broth Medium 250g FGFR3抑制剂(Dovitinib lactate) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg Dovitinib lactate1g 2,6- 二氯靛钠 2,6-Dichloroindophenol Sodium Salt Hydrate 室温干燥避光保存 Akt抑制剂(PF-AKT400) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg PF-AKT400双抗巧克力琼脂 Double anti-chocolate agar 250g RSK抑制剂(LJH685) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg LJH6851套 可逆性铜染试剂盒 PKC抑制剂(NSC305787 hydrochloride) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg NSC305787 hydrochloride2 ug pYr-1.3-hH1-EGFP pYr-1.3-hH1-EGFP 低温运输,-20℃保存 CARM1抑制剂(SGC2085) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg SGC20855次 大提柱式质粒 DNAout Maxi Column Plasmid DNAOUT 常温保存(RNase A溶液4℃保存) p53amyloid formation抑制剂(ReACp53) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg|50mg ReACp532 ug pET-28a-Sumo pET-28a-Sumo 低温运输,-20℃保存 p97ATPase抑制剂(ML241 hydrochloride) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg ML241 hydrochloride硝酸盐肉汤(还原)(军团菌) 20支/盒
|