中文名称：Ral抑制剂(BQU57)

英文名称：BQU57

产品规格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

产品货号：BJ-01X7973

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

人 B3GNT1 基因全长ORF克隆小鼠c-jun 免疫试剂盒现货供应

人 RING1 基因全长ORF克隆小鼠c-fos 免疫试剂盒*直销

人 RRAGC 基因全长ORF克隆小鼠CD8分子(CD8)免疫试剂盒进口、组装

人 SNIP1 基因全长ORF克隆小鼠CD4分子(CD4)免疫试剂盒进口、分装

人 NCF1 基因全长ORF克隆小鼠CD45分子(CD45)免疫试剂盒现货供应

人 PALM 基因全长ORF克隆小鼠CD44分子(CD44)免疫试剂盒*直销

人 ETNK2 基因全长ORF克隆小鼠CD34分子(CD34)免疫试剂盒进口、组装

人 ACTL7A 基因全长ORF克隆小鼠CD33分子(CD33)免疫试剂盒进口、分装

人 IP6K2 基因全长ORF克隆小鼠CD30分子(CD30)免疫试剂盒现货供应

人 ABHD2 基因全长ORF克隆小鼠CD19分子(CD19)免疫试剂盒*直销

人 STAMBP 基因全长ORF克隆小鼠CC趋化因子受体6(CCR-6)免疫试剂盒进口、组装

Ral抑制剂(BQU57)SIRT1和SIRT2抑制剂（Tenovin-1）  1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg  Tenovin-150次 柱式凋亡DNAout Column Apoptotic DNAOUT 常温

mTOR抑制剂（LY 303511 hydrochloride）  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg  LY 303511 hydrochloride1瓶 BALB/C 3T3细胞株 BALB/C 3T3 低温运输和保存

PFKFB3抑制剂(PFK-015)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  PFK-015盐增菌液（SC）颗粒 Selenite Cystine Broth 300ml/袋*10

Aurora抑制剂（CCT 137690）  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  CCT 1376901套 克必隆eTS PCR产物差减杂交试剂盒  

突变型IDH1R132H抑制剂（Mutant IDH1 inhibitor）  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  Mutant IDH1 inhibitor500mL Normal Tyrode’s Bicarbonate Buffered Solution  Normal Tyrode’s Bicarbonate Buffered Solution  常温保存

MEK5/ERK5抑制剂（BIX02189）  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  BIX0218950ng 可保种型蓝白T载体 Blue-White Vector T -20℃保存

MEK1/2抑制剂（AZD8330）  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  AZD83302 ug pmR-mCherry pmR-mCherry 低温运输，-20℃保存

Btk激酶抑制剂(LFM-A13)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg  LFM-A13干酪素  250g

Aurora A和B抑制剂(TAK-901)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  TAK-9011瓶 TM4细胞株 TM4 低温运输和保存

G-四联体结构抑制剂（360A iodide）  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  360A iodideBM液体培养基  250g

IKK-2抑制剂（SC-514）  1mL(10mM)|10mg|50mg  SC-514100mL 供体马血清 Donor Equine Serum -20℃保存

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)