培养操作步骤 ：

1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 

产品参数：

商品详细介绍：

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

实验要点及说明：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；

2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；

3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；

4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；

5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

操作要点：

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。

2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。

4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。

5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。

6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

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APC抑制剂(TAME)MTP抑制剂（Lomitapide）  1mL(10mM)|10mg|50mg  Lomitapide100mL 预混型BCIP/NBT溶液 Premixed BCIP/NBT Solution 常温保存

adenosine-A1receptor激动剂（Capadenoson）  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  Capadenoson2 ug pBD-NF-κB pBD-NF-κB 低温运输，-20℃保存

NEP抑制剂(AHU-377)  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  AHU-377100次 一步法质粒 DNAout 2.0 One-Step Plasmid DNAOUT 2.0 常温保存(溶液A需4℃保存)

factor Xa抑制剂（Fondaparinux sodium）  1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg  Fondaparinux sodium2 ug pET-43.1 Ek/LIC pET-43.1 Ek/LIC 低温运输，-20℃保存

血管紧张素II受体和上皮蛋白双重抑制剂(LCZ696)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg  LCZ696铜绿假单胞菌（绿脓杆菌）  

A2A腺苷受体激动剂(Regadenoson)  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg  Regadenoson1瓶 A549/DDP细胞株 A549/DDP 低温运输和保存

α2-adrenoceptor激动剂（Clonidine hydrochloride）  1mL(10mM)|100mg|500mg  Clonidine hydrochloride1套 玻璃匀浆器,2 mL Glass Homogenizer 常温保存

钙离子通道抑制剂（Bay-K-8644 ((R)-(+)-)）  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg  Bay-K-8644 ((R)-(+)-)10次 DNA嵌套缺失试剂盒 DNA Nested Deletion Kit -20℃保存

PPARα激动剂(BMS-687453)  1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg  BMS-687453100mL MOPS Buffer,0.5M,pH7.4   MOPS Buffer,0.5M,pH7.4   常温保存

HIF-PH抑制剂（Vadadustat）  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  Vadadustat100次 高GC革氏阳性细菌 PCR Mix 5（RPB1） Bacterial DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存

Na+-K+-2Cl-共转运蛋白抑制剂（Bumetanide）  1mL(10mM)|1g|5g  Bumetanide2 ug pMD2G pMD2G 低温运输，-20℃保存