操作规程 1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时. 2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。 3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。 4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。 7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。 8、结果分析 a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90) 中文名称:EGFR抑制剂(PD168393) 英文名称:PD168393 产品规格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg 产品货号:BJ-01X8199 PD168393是一个强的,不可逆转的EGFR抑制剂,IC50是0.7nM. 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! :194423-15-9 纯度:98.28% 分子量:369.22 储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1) 准备F-12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。 2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。 二. 细胞处理: 1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

细胞培养方法: 1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化; ③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止; ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清; ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基; ⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。 2、细胞复苏: ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。 ②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。 3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化; ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞; ④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。 人 CASP9 基因全长ORF克隆人雌激素(E)免疫试剂盒进口、组装 人 CD69 基因全长ORF克隆人雌二醇受体(ER)免疫试剂盒进口、分装 人 SH2D1A 基因全长ORF克隆人雌二醇(E2)免疫试剂盒现货供应 人 CASP1 转录变体alpha 基因全长ORF克隆人垂体腺苷酸环化激活肽(PACAP)免疫试剂盒*直销 人 LGALS9 转录变体2 基因全长ORF克隆人垂草扁桃酸(VMA)免疫试剂盒进口、组装 人 S100A9 基因全长ORF克隆人穿孔素/成孔蛋白(PRF1/PFP)免疫试剂盒进口、分装 人 S100A10 基因全长ORF克隆人程序性细胞死亡因子4(PDCD4)免疫试剂盒现货供应 人 S100A12 基因全长ORF克隆人程序性死亡因子配体1(PD-L1/CD274)免疫试剂盒*直销 人 S100A5 基因全长ORF克隆人程序性死亡-1(PD-1)免疫试剂盒进口、组装 人 S100A7 基因全长ORF克隆人成纤维细胞生长因子9(FGF9)免疫试剂盒进口、分装 人 S100A11 基因全长ORF克隆人成纤维细胞生长因子8(FGF8)免疫试剂盒现货供应 EGFR抑制剂(PD168393)即用型免疫组化试剂盒(山羊源一抗)(AP显色体系) 80T|160T Instant Immunohistochemistry Kit For Primary Antibody From Goat(AP Chromogenic System)250mL RIPA Buffer with EGTA RIPA Buffer with EGTA 常温保存 即用型免疫组化试剂盒(兔源一抗)(AP显色体系) 80T|160T Instant Immunohistochemistry Kit For Primary Antibody From Rabbit(AP Chromogenic System)1 管 Bl21 codonplusRIPL 大肠杆菌 BL21-CodonPlus-RIL E.coli Strain -80℃保存 即用型免疫组化试剂盒(小鼠源IgG型一抗)(AP显色体系) 80T|160T Instant Immunohistochemistry Kit For Primary Antibody From Mouse(AP Chromogenic System)2 ug pRARE pRARE 低温运输,-20℃保存 即用型免疫组化试剂盒(小鼠/兔源一抗)(AP显色体系) 80T|160T Instant Immunohistochemistry Kit For Primary Antibody From Rabbit Or Mouse(AP Chromogenic System)HBI肠杆菌科细菌生化鉴定条(GB) 5条/盒 即用型免疫组化试剂盒(兔源一抗)(冰冻切片/石蜡切片) 80T|160T Instant Immunohistochemistry Kit For Primary Antibody From Rabbit IgG2 ug pcDNA3 pcDNA3 低温运输,-20℃保存 即用型免疫组化试剂盒(小鼠源一抗)(冰冻切片/石蜡切片) 80T|160T Instant Immunohistochemistry Kit For Primary Antibody From Mouse IgG改良绿色酵母菌和真菌肉汤 m-GREEN YEAST and FUNGI BROTH 250g 即用型免疫组化试剂盒(小鼠源IgM型一抗) 80T|160T Instant Immunohistochemistry Kit For Primary Antibody From Mouse IgM5g 脂肪 Lipase 4℃保存 即用型免疫组化试剂盒(大鼠源一抗) 80T|160T Instant Immunohistochemistry Kit For Primary Antibody From Rat50T 马腺疫链球菌PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存 即用型免疫组化试剂盒(人源一抗) 80T|160T Instant Immunohistochemistry Kit For Primary Antibody From Human5mL 少突胶质前体细胞生长因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存 即用型免疫组化试剂盒(山羊源一抗) 80T|160T Instant Immunohistochemistry Kit For Primary Antibody From Goat100mL BES Buffer,0.5M,pH6.5 BES Buffer,0.5M,pH6.5 常温保存 即用型免疫组化试剂盒(兔源一抗) 80T|160T Instant Immunohistochemistry Kit For Primary Antibody From Rabbit50次 DNA电泳分子量标准(300-10000bp) DNAMETER 4℃保存
|