细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

中文名称：EGFR和VEGFR抑制剂(BMS-690514)

英文名称：BMS-690514

产品规格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg

产品货号：BJ-01X7939

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

人 PPHLN1 基因全长ORF克隆小鼠极低密度脂蛋白受体(VLDLR)免疫试剂盒进口、组装

人 INO80E 基因全长ORF克隆小鼠极低密度脂蛋白(VLDL)免疫试剂盒进口、分装

人 PSMA2 基因全长ORF克隆小鼠基质细胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)免疫试剂盒现货供应

人 RAB17 基因全长ORF克隆小鼠基质细胞衍生因子1α(SDF-1α/SDF1A)免疫试剂盒*直销

人 ASPH 基因全长ORF克隆小鼠基质金属蛋白抑制因子4(TIMP-4)免疫试剂盒进口、组装

人 COMMD2 基因全长ORF克隆小鼠基质金属蛋白抑制因子3(TIMP-3)免疫试剂盒进口、分装

人 VBP1 基因全长ORF克隆小鼠基质金属蛋白抑制因子2(TIMP-2)免疫试剂盒现货供应

人 SPATA24 基因全长ORF克隆小鼠基质金属蛋白抑制因子1(TIMP-1)免疫试剂盒*直销

人 MSRB3 基因全长ORF克隆小鼠基质金属蛋白9/明胶B(MMP-9/Gelatinase B)免疫试剂盒进口、组装

人 CGGBP1 基因全长ORF克隆小鼠基质金属蛋白8/中性粒细胞胶原(MMP-8)免疫试剂盒进口、分装

人 NUDT10 基因全长ORF克隆小鼠基质金属蛋白7(MMP-7)免疫试剂盒现货供应

EGFR和VEGFR抑制剂(BMS-690514)TRPV4激活剂(GSK1016790A)  1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg  GSK1016790A1瓶 786-O细胞株 786-O 低温运输和保存

MET激酶抑制剂(AMG-337)  1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg|200mg  AMG-3371个 0.5mLDNA超滤离心管(90-150KD)  

突变体EGFR变构抑制剂  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg  EAI0452 ug pCMV5-HA pCMV5-HA 低温运输，-20℃保存

GLUT1抑制剂(BAY-876)  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  BAY-876250mL MOPS Buffer,1.0M,pH7.4   MOPS Buffer,1.0M,pH7.4   常温保存

Raf抑制剂(AZ 628)  1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg  AZ 628100次 植物种属鉴定PCR Mix 7（质体 rpoB） Plant DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存

拓扑异构酶I和II抑制剂（TAS-103双盐酸盐）  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  TAS-103 dihydrochloride2 ug pMAL-p4x pMAL-p4x 低温运输，-20℃保存

IDO1抑制剂(IDO5L)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg  IDO5L葡萄糖酸盐  20支

DAPK抑制剂(TC-DAPK 6)  1mL(10mM)|10mg|50mg  TC-DAPK 61瓶 RH-35细胞株 RH-35 低温运输和保存

p70核糖体S6激酶1抑制剂(S6K1抑制剂)(PF-4708671)  1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg  PF-4708671Todd-Hewitt琼脂 Todd-Hewitt Agar 250g

Hsp90抑制剂  1mL(10mM)|10mg|25mg|100mg|200mg|500mg  Alvespimycin hydrochloride50mg β-D- 阿糖胞苷 Cytosine β-D-Arabinofuranoside 4℃保存

c-Raf抑制剂(GW 5074)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  GW 507450T 肠道病毒EV71/柯萨奇病毒A16型2联PCR检测试剂盒  低温运输，-20℃保存