操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

中文名称：PDGFRα/β和FLT3抑制剂

英文名称：Crenolanib

产品规格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

产品货号：BJ-01X7266

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

Fructus mori桑椹LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周IL-4I1  白细胞介素4诱导蛋白1抗体 规格: 0.2ml

Bovine Cytomegalovirus(BCMV)牛巨  病毒LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周EBP50/SLC9A3R1  细胞骨架连接质膜蛋白抗体 规格: 0.2ml

Providencia spp.普罗威登斯通用探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周ASTN2  星形肌动蛋白抗体 规格: 0.2mlPhospho-BAP1(Ser592)  磷酸化易基因1抗体(人) 规格: 0.1ml

Fusarium culmorum黄色镰刀PCR试剂盒 植物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Phospho-Syk (Tyr525/526)  磷酸化非受体型酪蛋白激抗体 规格: 0.1mlPIGA  红细胞磷脂酰肌醇聚糖A抗体 规格: 0.2ml

Fructus psoraleae补骨脂PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周C3a/C3a anaphylatoxin  补体C3a过敏毒素抗体 规格: 0.1mlCreatine Kinase MM  肌酸激M型抗体 规格: 0.2ml

Cache Valley Virus(CVV)卡奇谷病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Rabbit Anti-chicken IgG/Bio  标记的兔抗鸡IgG 规格: 0.1mlc-Myb  转录激活因子MYB抗体 规格: 0.2ml

Ovine Astrovirus (OAstV)绵羊星状病毒通用探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Bcl-10/CLAP/CIPER  Bcl-10抗体 规格: 0.1mlAFF4  淋巴细胞相关AF4样蛋白抗体 规格: 0.2ml

Natrii sulfas染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周phospho-NFKB p65(Ser536)  磷酸化细胞核因子抗体 规格: 0.1mlRPRD1A/P15RS  细胞周期依赖性激抑制相关蛋白抗体 规格: 0.2ml

Erysipelothrix spp丹毒丝属通用LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周CCDC104  卷曲螺旋结构域蛋白104抗体 规格: 0.2mlAconitase 1/IRP-1  铁调节蛋白1抗体 规格: 0.2ml

Porcine Transmissible Gasteroenteritis Virus(TGEV)猪传染性腹泻病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周TBX2/T-box2  新型抑基因抗体 规格: 0.2mlCCDC157  卷曲螺旋结构域蛋白157抗体 规格: 0.2ml

PDGFRα/β和FLT3抑制剂AO/EB双荧光染色试剂盒

MDC染色液

细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)

醋酸洋红染色液

硼酸洋红染色液

肥大细胞染色液(醛品红-橙黄G法)

肥大细胞染色液(阿利新蓝沙黄法)

结晶紫MES溶液(0.1%,pH6.0)

台盼蓝染色液(1%)

中性红染色液(0.1%)

中性红染色液(0.5%)