操作规程 1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时. 2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。 3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。 4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。 7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。 8、结果分析 a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90) 中文名称:EGFR抑制剂(AZD-9291 mesylate) 英文名称:AZD-9291 mesylate 产品规格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg 产品货号:BJ-01X7260 英文名称:AZD-9291 mesylate 产品规格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg AZD-9291mesylate是不可逆的突变体选择性EGFR抑制剂;对EGFRL858R和EGFRL858R/T790M的IC50值分别为12和1nM。 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! :1421373-66-1 别名:Osimertinib mesylate;Mereletinib mesylate 纯度:99.95% 分子量:595.71 结构式: AZD-9291 mesylate结构式 储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1) 准备F-12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。 2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。 二. 细胞处理: 1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

细胞培养方法: 1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化; ③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止; ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清; ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基; ⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。 2、细胞复苏: ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。 ②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。 3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化; ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞; ④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。 Macrobrachium Rosenbergii Nodavirus(MrNV)罗氏沼虾诺达病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周CCL26/Eotaxin 3 嗜酸粒细胞趋化蛋白3抗体 规格: 0.2ml Radix pulsatillae白头翁探针法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周Goat Anti-Mouse IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488标记的羊抗小鼠IgG 规格: 0.1ml Bonamia ostreae牡蛎包拉米虫LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周EphB2/Eph receptor B2 酪蛋白激受体B2抗体 规格: 0.1ml E.coli大肠杆通用探针法荧光定量PCR试剂盒(含致病性和非致病性) 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周REG1A 胰岛细胞再生因子ICRF抗体 规格: 0.2ml Flos campsis凌霄花LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周Rabbit Anti-Guinea pig IgM/PE-Cy3 PE-Cy3标记的兔抗豚鼠IgM 规格: 0.1ml Haemophilus suis猪嗜血杆LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周T4/L-Thyroxine 甲状素T4抗体 规格: 0.2ml Arthrinium spp.节菱孢霉属通用探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周LRP5 脂蛋白受体相关蛋白5抗体 规格: 0.1ml Chrysomyxa arctostaphyli云杉帚锈病PCR试剂盒 植物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周NALP6 富含亮重复结构域蛋白6抗体 规格: 0.2ml Torque Teno Sus Virus Type 2 (TTSuV-2)猪托克特诺病毒2型(猪细环病毒2型)LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用) 50次 低温 负20度 一年 2-4周SEMA6D 轴突导向因子SEMA6D抗体 0.2ml Avian Hepatitis E Virus(aHEV)禽戊型肝炎病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周CPT1B 肉毒碱棕榈酰基转移1B抗体 规格: 0.2ml EGFR抑制剂(AZD-9291 mesylate)Rhodamine 123染色液 吖啶橙染色液 台盼蓝染色液 中性红染色液 苏木素伊红染色试剂盒 TRAP染色试剂盒 革兰氏染色试剂盒 瑞氏染色试剂盒 姬姆萨染色试剂盒 亚甲基蓝染色试剂盒 酸性磷酸酶染色试剂盒
|