细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1) 准备F-12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。 2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。 二. 细胞处理: 1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。 中文名称:转录因子Stat3小分子抑制剂(BP-1-102) 英文名称:BP-1-102 产品规格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg 产品货号:BJ-01X7833 BP-1-102是有的转录因子Stat3的小分子抑制剂。 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! :1334493-07-0 纯度:99.23% 分子量:626.59 储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
细胞培养方法: 1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化; ③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止; ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清; ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基; ⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。 2、细胞复苏: ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。 ②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。 3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化; ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞; ④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。 操作规程 1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时. 2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。 3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。 4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。 7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。 8、结果分析 a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90) 紫云英苷 英文名:Astragalin 分子式:C21H20O11 分子量:448.38 :480-10-4 醉鱼草皂苷 Ⅳ 英文名: buddlejasaponin IV 分子式: C48H78O18 分子量: 942 : 蛇床子素 英文名: Osthole 分子式: C15H16O3 分子量: 244.29 : 484-12-8 京尼平 英文名: Genipin 分子式: C11H14O5 分子量: 226.23 : 6902-77-8检测方式:高效液相色谱法HPLC≥98% 栀子苷 英文名: Geniposide 分子式: C17H24O10 分子量: 388.37 : 24512-63-8 黄芪甲苷 英文名:Astragaloside IV 分子式:C41H68O14 分子量:784.97 :84687-43-4 麦冬皂苷D’ 英文别名: Diosgenin 3-O-[alpha-L-rhamnopyranosyl-(1-2)][beta-D-xylopyranosyl-(1-3)]-beta-D-glucopyranoside CAS登录号: 65604-80-0 分子式: C44H70O16 分子量: 854.47 麦冬甲基黄烷酮A 英文名: Methylophiopogonanone A 英文别名: R-Methylophiopogonanone A CAS登录号: 74805-92-8 分子式: C19H18O6 紫草呋喃A 英文别名: 1,4-Benzenediol,2-[4-[(1S)-1-(acetyloxy)-4- methyl-3-pentenyl]-2-furanyl]- CAS登录号: 85022-66-8 分子式: C18H20O5 分子量: 316.35 光萼野百合碱 英文名: Usaramine 英文别名: (15E)-12,18-Dihydroxysenecionan-11,16-dione CAS登录号: 15503-87-4 分子式: C18H25NO6 罗汉果黄素 CAS登录号: 156980-60-8 分子式: C34H42O18 分子量: 738.69 分子结构: 转录因子Stat3小分子抑制剂(BP-1-102)Potato Virus V(PVV)马铃薯病毒V型PCR试剂盒 植物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Canine Influenza Virus H1N1(CIV-H1N1)犬流感病毒H1N1型PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用) 50次 低温 负20度 一年 2-3周 冬虫夏草源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 种源性检测/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Human T-cell Lymphoma Virus 1(HTLV-1)人类嗜T淋巴 病毒1型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Pelargonium Line Pattern Virus(PLPV)天竺葵线状病毒RT-PCR试剂盒 植物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Rhizoma curcumae longae姜黄PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Norwalk Viruses G3(NV-3)诺如病毒G3型RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Rickettsia mooseri莫氏立克次体探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Flos inulae旋覆花染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Issyk-Kul Virus伊塞克湖病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 |