操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

中文名称：GSK-3β抑制剂(CP21R7)

英文名称：CP21R7

产品规格：1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg

产品货号：BJ-01X7836

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

泽泻醇A

英文别名：   Dammar-13(17)-en-3-one, 11, 23, 24, 25-tetrahydroxy-, (8α,9β,11,β 14β, 23S, 24R)-

CAS登录号：   19885-10-0

分子式：   C30H50O5

分子量：   490.70

(+)松脂素-β-D-吡喃葡萄糖苷

英文别名：   Pinoresinol 4-O-glucoside

CAS登录号：   69251-96-3

分子式：   C26H32O11

分子量：   520.53

泽泻醇A-24-醋酸酯

英文名：   Alisol A 24-acetate

英文别名：   (8alpha,9beta,11beta,14beta,23S,24R)-24-(Acetyloxy)-11,23,25-trihydroxydammar-13(17)-en-3-one

CAS登录号：   18674-16-3

分子式：   C32H52O6

野漆树苷

英文名：   Rhoifolin

英文别名：   APIGENIN-7-NEOHESPERIDOSIDE

CAS登录号：   17306-46-6

分子式：   C27H30O14

鸡屎藤苷酸甲酯

英文别名：   Methyl paederosidate

CAS登录号：   122413-01-8

分子式：   C19H26O12S

分子量：   478.47

鸡屎藤苷酸

CAS登录号：   18842-98-3

分子式：   C18H24O12S

分子量：   464.45

分子结构：     

鸡屎藤苷

CAS登录号：   20547-45-9

分子式：   C18H22O11S

分子量：   446.43

分子结构：     

三七皂苷R2(S型)

英文名：   20(S)-NotoginsenosideR2

英文别名：   Ginsenoside Ng-R2

CAS登录号：   80418-25-3

分子式：   C41H70O13

异夏佛塔苷

英文名：   Isoshaftoside

英文别名：   apigenin-6-α-L-arabinosyl-8-β-glucoside

CAS登录号：   52012-29-0

分子式：   C26H28O14

白皮杉醇

英文名：   Piceatannol

英文别名：   (E)-4-[2-(3,5Dihydroxyphenyl)ethenyl]1,2-benzenediol;3,3',4,5'-Tetrahydroxy-trans-stilbene

CAS登录号：   10083-24-6

分子式：   C14H12O4

马兜铃酸A

英文名：   Aristolochic Acid A

英文别名：   3,4-methylenedioxy-8-methoxy-10-nitro-1-phenanthrenecarboxylicacid

CAS登录号：   313-67-7

分子式：   C17H11NO7

GSK-3β抑制剂(CP21R7)台盼蓝染色液(0.4%)  20ml  0.4% Typan Blue Solution25g 丙酮酸钠 Pyruvic Acid Sodium Salt -20℃保存

台盼蓝染色法细胞活力检测试剂盒  100T  Typan Blue Staining Cell Viability Assay Kit50T 鼠疫杆菌PCR检测试剂盒   低温运输，-20℃保存

细胞凋亡检测试剂盒III(FITC)  20T  1 g PDTC （NF-κB抑制剂/抗氧化剂） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存

细胞凋亡检测试剂盒IV(CY3)  20T/100T  250mL Galactose Solution（半乳糖溶液）,20%（W/V） Galactose Solution,20%（W/V） 常温保存

细胞凋亡检测试剂盒IV(FITC+POD)  20T  5次 DAB法辛杂交试剂盒  

细胞凋亡检测试剂盒V(POD)  100T  2 ug Piz/v5-His Piz/v5-His 低温运输，-20℃保存

细胞凋亡检测试剂盒Ⅱ(AP)  20T  OADC添加剂  10ml*10支

台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒  100T  1瓶 LTEP-a-2细胞株 LTEP-a-2 低温运输和保存

JC-1线粒体膜电位荧光探针  1mg|5mg  CVT琼脂 CVT Agar 250g

CCCP细胞凋亡诱导剂(50mM)  100ul  Carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone100g 丙烯酰胺 Acrylamide 密封阴凉保存

DAPI溶液(即用型)  10ml|50mL  DAPI solution(ready-to-use)1000mL TAE,10X   TAE,10X   常温保存