中文名称：MDM2抑制剂(SAR405838)

英文名称：SAR405838

产品规格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

产品货号：BJ-01X7837

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

闹羊花毒素V

英文别名：   (2β,3β,14R)-2,3-Epoxygrayanotoxane-5,6β,10,14,16-pentol 14-acetate

CAS登录号：   37720-86-8

分子式：   C26H40O9

分子量：   496.59

闹羊花毒素III

英文别名：   (2β,3β,14R)-2,3-Epoxygrayanotoxane-5,6β,10,14,16-pentol

CAS登录号：   26342-66-5

分子式：   C20H32O6

分子量：   368.467

闹羊花毒素II

英文别名：   (14R)-2β,3β-Epoxygrayanotoxane-5,6β,10,14,16-pentol 6-acetate

CAS登录号：   26116-89-2

分子式：   C22H34O7

分子量：   410.50

丹皮酚原苷

英文名：   1-[4-methoxy-2-[(2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-[[(2R,3R,4S,5S)-3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl]oxymethyl]oxan-2-yl]oxy-phenyl]ethanone

CAS登录号：   72520-92-4

分子式：   C20H28O12

分子量：   460.43

北美芹素

英文别名：   (Z)-2-Methyl-2-butenoic acid [(9R)-9-acetoxy-9,10-dihydro-8,8-dimethyl-2-oxo-2H,8H-benzo[1,2-b:3,4-b']dipyran-10α-yl] ester

CAS登录号：   13161-75-6

分子式：   C21H22O7

分子量：   386.398

紫草酸

英文别名：   4--2-(3,4-dihydroxy-phenyl)-7-hydroxy-2,3-dihydro-benzofuran-3-carboxylic acid

CAS登录号：   28831-65-4

分子式：   C27H22O12

分子量：   538.459

灵芝酸A

英文别名：   (25R)-7β,15α-Dihydroxy-3,11,23-trioxo-5α-lanost-8-en-26-oic aci

CAS登录号：   81907-62-2

分子式：   C30H42O7

分子量：   514.65

3-O-D-葡萄糖(1→4)-[ L-鼠李糖(1→2)]-L-阿拉伯糖-23-羟基羽扇豆20(29)-烯-28–酸

英文名：   23-hydroxyl lup-20(29)-en-28-oic acid, 3-O-b-D-glucopyranosyl(1→4)[-L-rhamnopyranosyl) (1→2)--L-arabinopyranoside]

CAS登录号：   848784-85-0

分子式：   C47H76O17

分子量：   912

3-O-D-葡萄糖( 1→4)-[ L-鼠李糖(1→2)]-L-阿拉伯糖-常春藤配基- 28-O-鼠李糖(1→4)葡萄糖(1→6)葡萄糖苷

英文名：   3-O-D-glucopyranosyl( 1→4)- [ L-rhamnopyranosyl(1→2)]-L-arabinopyranosyl 23-hydroxyl lup-20(29)-en-28-oic acid – 28-O-rhamnopyranosyl(1→4)glucopyranosyl(1→6)glucopyranoside

CAS登录号：   68027-14-5

分子式：   C65H106O31

分子量：   1382

3-O-D-葡萄糖( 1→4)-[ L-鼠李糖(1→2)]-L-阿拉伯糖-23-羟基羽扇豆20(29)-烯-28–酸- 28-O-鼠李糖(1→4)葡萄糖(1→6)葡萄糖苷

英文名：   3-O-D-glucopyranosyl( 1→3)-L-rhamnopyranosyl(1→2)-L-arabinopyranosyl lupinic acid– 28-O-rhamnopyranosyl(1→4)glucopyranosyl(1→6)glucopyranoside

CAS登录号：   366814-43-9

分子式：   C65H106O30

分子量：   1366

Hederacolchiside E

CAS登录号：   33783-82-3

分子式：   C65H106O30

分子量：   1366

分子结构：     

MDM2抑制剂(SAR405838)DAPI溶液(1mg/ml)  1ml  DAPI solution,1mg/ml50次 脂蛋白纯化试剂盒  

CCK-8试剂盒  100T|500T|500T*10  Cell counting KIT-82 ug pSRE-Luc pSRE-Luc 低温运输，-20℃保存

Hoechst 33258染色液  1mL  50次 柱式DNA清除剂 Column DNA Erasol 4℃保存

钙荧光探针(Fluo 3-AM)  100ug|1mg  2 ug pCMV-SPORT6 TTC12 pCMV-SPORT6 TTC12 低温运输，-20℃保存

碘化丙啶PI  10mg  Propidium Iodide改良V-P培养基 V-P Medium,Modified 250g

噻唑蓝MTT  250mg|1g  Thiazolyl blue tetrazolium bromid100g 聚乙烯吡咯烷酮 K360 Polyvinylpyrrolidone(PVP K360) 室温保存

MTT细胞增值与毒性检测试剂盒  500T  MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit50T 乳腺癌耐药基因PCR检测试剂盒  低温运输，-20℃保存

细胞核提取试剂盒  50T|100T  Nuclear Extraction Kit200mg L-NAME（eNOS抑制剂） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存

线粒体提取试剂盒  50T|100T  250mL EDTA Solution（EDTA溶液）,14%,pH7.4  EDTA Solution,14%,pH7.4  常温保存

线粒体膜电位检测试剂盒(JC-10)  100T  Mitochondrial Membrane Potential Kit(JC-10 Assay)0.5mL dNTP溶液，2.5 mM dNTP Solution，2.5 mM -20℃保存

吖啶橙-EB双染色试剂盒  50ml*2|250ml*2  Acridine Orange(AO)/EB Double Stain Kit2 ug pIRES-EGFP pIRES-EGFP 低温运输，-20℃保存

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)