操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

中文名称：β-catenin抑制剂(JW 55)

英文名称：JW 55

产品规格：1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg

产品货号：BJ-01X8172

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

人 CPSF6 基因全长ORF克隆人谷-半胱连接调节亚基(GCLM)免疫试剂盒现货供应

人 C1orf54 基因全长ORF克隆人谷[NMDA]受体亚基ε-2(NR-2)抗体免疫试剂盒*直销

人 CTRC 基因全长ORF克隆人谷[NMDA]受体亚基ε-2(NR-2)免疫试剂盒进口、组装

人 CLDN7 基因全长ORF克隆人孤腓肽(OFQ/N)免疫试剂盒进口、分装

人 PLK3 基因全长ORF克隆人钩端螺旋体IgM(Lebtospira)免疫试剂盒现货供应

人 CLN8 基因全长ORF克隆人钩端螺旋体IgG(Leptospira)免疫试剂盒*直销

人 DPP3 基因全长ORF克隆人弓蛔虫(Tc)抗体(IgG)免疫试剂盒进口、组装

人 DRC1 基因全长ORF克隆人庚型肝炎病毒抗体(IgM)免疫试剂盒进口、分装

人 CCR8 基因全长ORF克隆人庚型肝炎病毒(HGV)抗原免疫试剂盒现货供应

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β-catenin抑制剂(JW 55)乙酰乳酸合酶(ALS)抑制剂(Terbuthylazine)  1mL(10mM)|100mg|500mg  Terbuthylazine2 ug pYRP7 pYRP7 低温运输，-20℃保存

昆虫几丁质酶和N-乙酰氨基己糖苷酶抑制剂  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  Chitinase-IN-2 hydrochloride1mg 羧肽 Y( 酵母 ) Carboxypeptidase Y -20℃保存

生长抑制剂(Clofentezine)  1mL(10mM)|100mg  Clofentezine2 ug pET-43.1a(+) pET-43.1a(+) 低温运输，-20℃保存

光合作用抑制剂(Terbutryn)  1mL(10mM)|500mg  Terbutryn金氏B培养基 King’s B medium 250g

α-galactosidase A抑制剂  1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg  Migalastat hydrochloride1瓶 A549细胞株 A549 低温运输和保存

ORL-1激活剂  1mL(10mM)|2mg|5mg  Cebranopadol ((1α,4α)stereoisomer)1套 玻璃匀浆器,10 mL Glass Homogenizer 常温保存

BET抑制剂（BET-BAY 002 S enantiomer）  1mL(10mM)|2mg|5mg  BET-BAY 002 S enantiomer150次 天净沙DNA甲基化修饰试剂盒 Embedded Bisulfite Modification Kit ，常温保存，蛋白K需要-20℃保存。

5-HT1F受体激动剂  1mL(10mM)|2mg|5mg  LY 344864 S-enantiomer100mL MOPS Buffer,0.5M,pH8.0   MOPS Buffer,0.5M,pH8.0   常温保存

MDM2抑制剂（NVP-CGM097 stereoisomer）  1mL(10mM)|2mg|5mg  NVP-CGM097 stereoisomer100uL 氨苄抗性基因PCR引物 Common PCR Primer -20℃保存

Eg5别构抑制剂（Litronesib Racemate）  1mL(10mM)|2mg|5mg  Litronesib Racemate2 ug pMDLg pRRE pMDLg pRRE 低温运输，-20℃保存

EGFR抑制剂（EGF816 S-enantiomer）  1mL(10mM)|2mg|5mg  EGF816 S-enantiomer50 mg Cyclosporin A （免疫抑制剂/PP2B抑制剂） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存