细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

中文名称：KSP抑制剂（SB-743921）

英文名称：SB-743921

产品规格：1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg

产品货号：BJ-01X8281

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

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人 ACE2 基因全长ORF克隆牛三碘甲状腺原(T3)免疫试剂盒进口、分装

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人 IL1RL1 / ST2 转录变体2 基因全长ORF克隆牛乳脂肪球EGF因子蛋白(MFGE8)免疫试剂盒*直销

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KSP抑制剂（SB-743921）ATP酶测试盒(组织及细胞膜不需高速离心)  50T  50T 鲤春病毒PCR检测试剂盒   低温运输，-20℃保存

超微量ATP酶测试盒(测Na+K-ATPase)  25T  5mL 动物上皮细胞生长因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存

超微量ATP酶测试盒(测Ca2+Mg2+ATPase)  25T  10mL Agarose Gel Loading Buffer-Ficoll (菲可型上样液），6X    Agarose Gel Loading Buffer-Ficoll ，6X    常温保存

超微量ATP酶测试盒(Na+K+、Ca2+Mg2+ATPase)  25T  1mL 分子生物学级糖原溶液，10mg/mL Glycogen Solution 4℃保存

琥珀酸脱氢酶测试盒  48T  2 ug pGC- 2 pGC- 2 低温运输，-20℃保存

肌酸激酶测试盒(CK)  24T  抗生素检定培养基2号（低pH） Antibiotic Agar NO.2 250g

总脂酶测试盒(脂蛋白脂酶LPL和肝脂酶HL测试盒)  48T  1瓶 CTLA4 Ig-24细胞株 CTLA4 Ig-24 低温运输和保存

游离脂肪酸(NEFA)测试盒  48T  50次 柱式血液DNA-RNAout Column Blood DNA-RNAOUT 4℃保存

NAD+/NADH荧光检测试剂盒  50T|100T  500U 碱性，牛小肠 Alkaline Phosphatase，Calf Intestinal -20℃保存

NAD+/NADH比色检测试剂盒  50T|100T  250mL PIPES Buffer，1.0M, pH7.4  PIPES Buffer，1.0M, pH7.4  常温保存

细胞活性氧ROS分析试剂盒(H2DCFDA绿色荧光探针)  1000T  Cells Reactive oxygen species Analysis Kit100mL 大肠杆菌零诱导培养基