操作规程 1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时. 2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。 3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。 4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。 7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。 8、结果分析 a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90) 中文名称:EGFR和ErbB2抑制剂(AST-1306 TsOH) 英文名称:AST-1306 TsOH 产品规格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg 产品货号:BJ-01X8042 AST-1306TsOH是不可逆的EGFR和ErbB2抑制剂,IC50分别为0.5nM和3nM,对突变型EGFR T790M/L858R同样有抑制性,对ErbB家族的抑制性比其它激酶强3000倍。 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! :1050500-29-2 别名:AST-1306 (p-Toluenesulfonic acid);AST1306 (p-Toluenesulfonic acid);AST 1306 (p-Toluenesulfonic acid) 纯度:98.85% 分子量:621.08 储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1) 准备F-12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。 2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。 二. 细胞处理: 1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
细胞培养方法: 1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化; ③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止; ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清; ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基; ⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。 2、细胞复苏: ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。 ②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。 3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化; ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞; ④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。 人 RAN 基因全长ORF克隆人乙基丙二酸免疫试剂盒现货供应 人 RAB11A 基因全长ORF克隆人乙肝表面抗原大蛋白(HBV-LP)免疫试剂盒*直销 人 RAB5A 基因全长ORF克隆人乙醇脱氢(ADH)免疫试剂盒进口、组装 人 EBAG9 基因全长ORF克隆人乙胺碘呋酮(AD)免疫试剂盒进口、分装 人 RAB39B 基因全长ORF克隆人胰脂肪(PL)免疫试剂盒现货供应 人 RGS2 基因全长ORF克隆人胰抑制素(Pancreastatin)免疫试剂盒*直销 人 GLTP 基因全长ORF克隆人胰腺癌标志物CA242 免疫试剂盒进口、组装 人 COMMD10 基因全长ORF克隆人胰高血糖素样肽2受体(GLP2R)免疫试剂盒进口、分装 人 RERG 基因全长ORF克隆人胰高血糖素样肽2(GLP2)免疫试剂盒现货供应 人 CSRP3 基因全长ORF克隆人胰高血糖素样肽1受体(GLP1R)免疫试剂盒*直销 人 MID1IP1 基因全长ORF克隆人胰高血糖素样肽1(GLP-1)免疫试剂盒进口、组装 EGFR和ErbB2抑制剂(AST-1306 TsOH)CYP3A4诱导抑制剂(Isosilybin) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg Isosilybin1.5mL 绿如蓝核酸染料(UV) DNAGREEN 4℃保存 CCR1激动剂(NSC5844) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg NSC58442 ug pGEM 5ZF(+) pGEM 5ZF(+) 低温运输,-20℃保存 Nek2/Hec1抑制剂(INH6) 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg INH6抗生素检定培养基5号 Antibiotic No.5(PH8.0) 250g PKR激活剂(PKR-IN-2) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg PKR-IN-21瓶 DU-145细胞株 DU-145 低温运输和保存 PI3Kδ抑制剂(TGR-1202 R-enantiomer) 1mL(10mM)|2mg|5mg TGR-1202 R-enantiomerSDC(TSA W/TTC)平板 9cm*10个 HMG-CoA还原酶抑制剂(Fluvastatin sodium) 1mL(10mM)|50mg|100mg Fluvastatin sodium1瓶 AE-2细胞株 AE-2 低温运输和保存 PDE3A抑制剂(Cilostazol) 1mL(10mM)|50mg|100mg Cilostazol100mL POPSO Buffer,0.2M,pH8.5 POPSO Buffer,0.2M,pH8.5 常温保存 guanylate cyclase激活剂(Cinaciguat) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg Cinaciguat1mL 环A溶液,10mg/mL Cyclosporin A Solution -20℃避光保存 心脏晚期钠电流抑制剂(GS967) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg GS9672 ug pPRIME-TREX-GFP-FF3 pPRIME-TREX-GFP-FF3 低温运输,-20℃保存 PDE5抑制剂(Sildenafil citrate) 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg Sildenafil citrate蛋白胨水(肉汤) 20支 HIF-PH抑制剂(Molidustat) 2mg|5mg|10mg|50mg|100mg Molidustat2 ug pCAMBIA1305.2 pCAMBIA1305.2 低温运输,-20℃保存
|