操作步骤: 1:样品准备:取1毫升细胞培养上清(贴壁和悬浮细胞都可以 已培养48小时以上),在16000g离心5分钟,小心弃去上清,避免丢失沉淀(沉淀量有可能很少,目视看不到)。将沉淀用无菌PBS重悬,在16000g离心5分钟,同样小心弃去上清,如此反复用无菌PBS洗三次 将获得的沉淀用100微升超纯水重悬,置于100℃水浴中孵育5分钟。如此制备好的样品可在4℃保存1到2个月。 2:PCR反应的准备: 待各组份融化后先瞬时离心,然后轻弹混匀。按下表在已灭菌的PCR管中配制反应体系,每次实验需加一个阴性和一个阳性对照,测试反应管可以有多个。配制过程中应注意无菌,并注意避免操作产生的气溶胶造成样品间的交叉污染,推荐在有风压的设备如超净台或生物安全柜中进行操作。建议配制完毕后瞬时离心以使液体沉至管底。 服务流程: 接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。 产品名称 | 英文名称 | 货号 | 口蹄疫病毒SAT3亚型RT-LAMP试剂盒 | RT-LAMP kit for foot and mouth disease virus sat3 subtype | BJ-P987913 |
它具有下列特点: 1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。 2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增鲍疱疹样病毒,与其他植物没有交叉反应。 3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。 4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。 5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次,但只能用于科研。 使用及效果: PCR反应特点 (1) 特异性强 PCR反应的特异性决定因素为: ①引物与模板DNA特异正确的结合; ②碱基配对原则; ③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性; ④靶基因的特异性与保守性。 其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。 (2) 灵敏度高 PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中zui小检出率为3个细菌。 (3) 简便、快速 PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。 (4) 对标本的纯度要求低 不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。 储存条件: 仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法 1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。 3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。 4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。 5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 PCR实验方法步骤: 方法 1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。 2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。 3:结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。 5g加利福尼亚拟威尔酵母Human PIVNP(N-terminal propeptide of Collagen alpha-1(IV) chain) ELISA Kit 100g竹生炭角菌Human CD25(Interleukin 2 Receptor Alpha) ELISA Kit 25g雪腐微座孢Human CD32(Receptor II for the Fc Fragment of IgG) ELISA Kit 5g发酵乳杆菌Human GP4(Plaet Membrane Glycoprotein IV) ELISA Kit 1g毛地黄壳针孢Human CCDC3(Coiled-coil domain-containing protein 3) ELISA Kit 5g弯孢菌Human CD40L(Cluster of Differentiation 40 Ligand) ELISA Kit 100mg匍匐曲霉原变种Human CD80(T-lymphocyte activation antigen CD80) ELISA Kit 10mg金橙黄微小杆菌Human CD56(Neural Cell Adhesion Molecule) ELISA Kit 25mg芽孢杆菌Human CD13(Aminopeptidase N) ELISA Kit 25g短波单胞菌属Human DLL1(Delta-like protein 1) ELISA Kit 5g青春双歧杆菌Human E-Cad(E-Cadherin) ELISA Kit 1g匍枝根霉原变种Human CRP(C-Reactive Protein) ELISA Kit 5g枯草芽孢杆菌Human CXCL10(Interferon Gamma Induced Protein 10kDa) ELISA Kit 1g藤黄浅藤黄链霉菌Human RAC1(Ras Related C3 Botulinum Toxin SubstRate 1) ELISA Kit 250mg杂色曲霉Human EG-VEGF(Endocrine Gland Derived Vascular Endothelial Growth Factor) ELISA Kit 5g苹果黑腐皮壳菌Human PI3(Peptidase Inhibitor 3, Skin Derived) ELISA Kit 25mg白地霉Human GP4(Plaet Membrane Glycoprotein IV) ELISA Kit 口蹄疫病毒SAT3亚型RT-LAMP试剂盒Tbx21/T-bet T细胞介导的转录调节因子Tbx21抗体顶膜钠依赖性胆盐转运体蛋白抗体原丁酸三乙酯Mouse CRH (Corticotropin Releasing Hormone) ELISA Kit TBX18 转录因子Tbx18抗体去整合素样金属蛋白酶8抗体聚氧乙烯二胺Mouse C-P (C-Peptide) ELISA Kit TCF7L2 转录因子7类似物2抗体芳香乙酰胺脱乙酰基酶样蛋白3抗体聚乙二二甲 (NHD)Mouse CK-MB (Creatine Kinase MB Isoenzyme) ELISA Kit TCTP 翻译控制肿瘤蛋白抗体ACN9蛋白抗体聚乙二二甲 (NHD)Mouse CKMT1A (Creatine Kinase, Mitochondrial 1A) ELISA Kit Phospho-TCTP (Ser46) 磷酸化翻译控制肿瘤蛋白抗体双链RNA腺苷酸脱氨基酶抗体(N端)频那Mouse CKMT1B (Creatine Kinase, Mitochondrial 1B) ELISA Kit TDP-43 Tar DNA 结合蛋白43抗体腺苷单磷酸活化蛋白激酶α2抗体5-溴-2-甲氧基苯甲Mouse CKM (Creatine Kinase, Muscle) ELISA Kit PHLDA1/TDAG51 T淋巴细胞凋亡相关蛋白TDAG51抗体腺苷酸激酶抗体5-溴-2-甲氧基苯甲Mouse AGEs (Advanced Glycation End Products) ELISA Kit TEM 1/CD248 内涎蛋白/内皮唾液酸蛋白抗体α2巨球蛋白样蛋白1抗体 α2ML1N-(叔丁氧羰基)-1-(2,4-二基)-L-组氨酸Mouse NTXI (Cross Linked N-Telopeptide of Type I Collagen) ELISA Kit |