PCR反应五要素: 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。 设计引物应遵循以下原则: ①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。 ②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。 ③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 ④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。 ⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数*个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。 ⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处。 ⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。 参数规格: 产品名称:石膏样小孢子菌LAMP试剂盒说明书 英文名称:Lamp kit for microsporidium gypsum 货号:BJ-P988216 产品规格:50T 分类:荧光定量PCR试剂盒 储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。 运输:低温、避光,快递免费送货上门。 产品特点: 本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏 PCR检测试剂盒 。 产品特点: ◇高特异性:与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增; ◇高灵敏度:检测灵敏度可达10~100拷贝; ◇操作简便:该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测; ◇高通量:多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。 样品要求及注意事项: 1、 如果提供实验材料,实验材料必须保证新鲜,请您采样后立刻放入液氮中速冻或加入样稳定剂,并用干冰运输。 2、 如果样品可以用Trigol法提总RNA ,也可以将样品研磨后放在 Trigol中,动植物组织 : 50~100mg/mlTrigol,贴壁细胞:10cm2/mlTrigol,悬浮细胞:5×106动植物,酵母细胞或细菌细胞10×107/mlTrigol。 3、 如果提供RNA或cDNA我们要对您提供的材料进行评估。 4、 实时荧光定量PCR服务您一定要提供样品及要扩增基因的详细信息。 储存条件: 14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法 1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。 3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。 4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。 5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 使用方法: 一、稀释标准曲线样品(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。 1. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。 2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液,*用带芯枪头,下同)。 3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照(浓度为 1×10E8 拷贝/μL,试剂盒提供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。 4. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。 5. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。 6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。 二、样品 DNA 的制备 7. 用自选方法纯化样品的 DNA,本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。 8. 如果有 N 个样品,则需要进行 N+2 个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。 三、设置 qPCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行) 9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复,则标记 N+9 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),6 个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做 1 次重复,则标记 N+4 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),1 个用于PCR 阳性对照。 特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途! 25g乳杆菌属Anti-CAPN11 Antibody 5g间型腐霉Anti-CAPN12 Antibody 1g羊泰勒虫(张家川株-2)Anti-CARD10 Antibody 5g大豆慢生根瘤菌Anti-CAPN9 Antibody 1g秦氏蜜环菌Anti-CARD8 Antibody 5g豌豆根瘤菌Anti-CARD19 Antibody 25g霍利斯格里蒙菌Anti-CARF Antibody 5g宇佐美曲霉Anti-CARF Antibody 100g掌状花耳Anti-CARM1 Antibody 25g微小杆菌Anti-CASP4 Antibody 500g委内瑞拉链霉菌Anti-CASP5 Antibody 100g节杆菌属Anti-CASP7 Antibody 25g环状芽胞杆菌Anti-CASZ1 Antibody 500g稻平脐孺孢Anti-CAVIN3 Antibody 100g生脂固氮螺菌Anti-CASP9 Antibody 25g枯草芽孢杆菌Anti-CBFA2T3 Antibody 500g植物乳杆菌植物亚种Anti-CBFB Antibody 石膏样小孢子菌LAMP试剂盒说明书磷酸化转录调节因子CEBP α 抗体4-(三氟甲硫基)苯胺Porcine ORM2 (Orosomucoid 2) ELISA Kit CLEC2D蛋白抗体环丁烷甲酸Porcine VEGF-C (Vascular Endothelial Growth Factor C) ELISA Kit 富含半胱氨酸与表皮生长因子样蛋白2抗体环丁烷甲酸Porcine c-fos ELISA Kit 醌氧化还原酶样蛋白1抗体环丁烷甲酸Porcine VF (Visfatin) ELISA Kit 铜代谢结构域蛋白9抗体3-氟苯酚Porcine ADIPOR1 (Adiponectin Receptor 1) ELISA Kit 浓缩素2复合亚基D3抗体3-氟苯酚Porcine GTF2B (General Transcription Factor IIB) ELISA Kit 磷酸化细胞分裂周期蛋白6抗体3-氟苯酚Porcine SYK (Spleen Tyrosine Kinase) ELISA Kit 磷酸化周期素依赖激酶2抗体三氟磺酸亚铜(I)苯联合体 (2:1)Porcine OGP (Osteogenic Growth Peptide) ELISA Kit 注意事项: 1. 建议使用新鲜采取的动物组织,若为长期冷冻组织,应尽量避免反复冻融,否则会导致模板的降解,影响PCR效率。 2. 试剂Buffer AL若低温保存,易产生沉淀。在使用前务必将其在室温中放置一段时间,也可在37℃水浴中预热10 min,以溶解沉淀,混匀后再使用。 3. 电泳检测时,切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否则,电泳时会在泳道中出现一大团拖尾亮带,影响实验结果。 4. 建议扩增片段长度1 kb以内,以便扩增效率佳。 5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。 |