中文名称：IDH2突变酶抑制剂(Enasidenib)

英文名称：Enasidenib

产品规格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

产品货号：BJ-01X7249

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

Semen sojae preparatum淡豆豉探针法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周LSP1  白细胞F肌动蛋白结合蛋白抗体 规格: 0.2ml

Davainea proglottina节片代凡绦虫LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周PAR4  蛋白激活受体4抗体 规格: 0.2ml

Bovine Parvovirus (BPV)牛细小病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Mouse Anti-Bov IgG/RBITC  罗丹明标记的小鼠抗牛IgG 规格: 0.1mlKLHL26  Kelch样蛋白26抗体 规格: 0.2ml

Radix notoginseng三七LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周TFR2/Transferrin Receptor 2  转铁蛋白受体2抗体 规格: 0.2mlHOXB5  同源盒蛋白HOXB5抗体 规格: 0.1ml

Infectious Bovine Rhinotracheitis Virus(IBRV)牛传染性鼻气管炎病毒LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 1-2周SOX9/SRA1  转录因子SOX9蛋白抗体 规格: 0.1mlTULP2/CT65/Cancer testis antigen 65  瘤/睾抗原65 规格: 0.2ml

Marek's Disease Virus(MDV)马立克氏病病毒3型探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周ERK4  细胞外信号调节激4抗体 规格: 0.1mlAngiotensin II type 1A receptor  管紧张素Ⅱ1A型受体抗体 规格: 0.1ml

Canine Norovirus 犬诺瓦克病毒染料法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周CCL16/HCC-4  巨噬细胞性蛋白16抗体 规格: 0.2mlRabbit Anti-mouse IgG/FITC  FITC标记的兔抗小鼠IgG 规格: 0.3ml

石斑鱼源性成分染料法荧光定量PCR试剂盒 种源性检测/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周KCTD5  钾离子通道四聚体结构域蛋白5抗体 规格: 0.2mlStanniocalcin 1  斯钙素抗体 规格: 0.1ml

Ascosphaera apis蜜蜂球囊探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周PI3K/PI3 kinase p85 alpha subunit  磷脂酰肌醇激抗体 规格: 0.1mlTRIM7/RNF90  糖原生成素相互作用蛋白抗体 规格: 0.2ml

Human Immunodeficiency Virus 2(HIV-2)人免疫缺陷病毒II型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周HBV pre S1/S2 protein  人乙肝毒pre S1/S2蛋白抗体 规格: 0.1mlDUSP13  双特异性磷酸13抗体 规格: 0.2ml

IDH2突变酶抑制剂(Enasidenib)PKH67/PI双染细胞毒性检测试剂盒

CFSE/PI双染细胞毒性检测试剂盒

PKH67细胞增殖与毒性检测试剂盒

PKH26细胞增殖与毒性检测试剂盒

细菌活性检测试剂盒-CCK8

细菌活性检测试剂盒-AlamarBlue

酵母活性检测试剂盒-AlamarBlue

CFSE细胞增殖与毒性检测试剂盒

细胞活性检测试剂盒-绿色荧光

CCK-8反应终止液

细胞周期检测试剂盒

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)