操作步骤: 1:样品准备:取1毫升细胞培养上清(贴壁和悬浮细胞都可以 已培养48小时以上),在16000g离心5分钟,小心弃去上清,避免丢失沉淀(沉淀量有可能很少,目视看不到)。将沉淀用无菌PBS重悬,在16000g离心5分钟,同样小心弃去上清,如此反复用无菌PBS洗三次 将获得的沉淀用100微升超纯水重悬,置于100℃水浴中孵育5分钟。如此制备好的样品可在4℃保存1到2个月。 2:PCR反应的准备: 待各组份融化后先瞬时离心,然后轻弹混匀。按下表在已灭菌的PCR管中配制反应体系,每次实验需加一个阴性和一个阳性对照,测试反应管可以有多个。配制过程中应注意无菌,并注意避免操作产生的气溶胶造成样品间的交叉污染,推荐在有风压的设备如超净台或生物安全柜中进行操作。建议配制完毕后瞬时离心以使液体沉至管底。 服务流程: 接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。 产品名称 | 英文名称 | 货号 | 犬巴贝斯虫LAMP试剂盒说明书 | Lamp kit for Babesia canis | BJ-P987531 |
它具有下列特点: 1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。 2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增鲍疱疹样病毒,与其他植物没有交叉反应。 3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。 4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。 5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次,但只能用于科研。 使用及效果: PCR反应特点 (1) 特异性强 PCR反应的特异性决定因素为: ①引物与模板DNA特异正确的结合; ②碱基配对原则; ③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性; ④靶基因的特异性与保守性。 其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。 (2) 灵敏度高 PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中zui小检出率为3个细菌。 (3) 简便、快速 PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。 (4) 对标本的纯度要求低 不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。 储存条件: 仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法 1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。 3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。 4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。 5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 PCR实验方法步骤: 方法 1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。 2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。 3:结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。 1gPseudomonasHuman Total HSP-90(Heat Shock Protein 90 total) ELISA Kit 1g同合小克银汉霉Human CASP5(Caspase-5) ELISA Kit 25g枯草芽孢杆菌Human Glicentin(Glicentin) ELISA Kit 5g酿酒酵母Human RF-IgG(Rheumatoid Factor IgG) ELISA Kit 1g大肠埃希菌Human RF-IgA(Rheumatoid Factor IgA) ELISA Kit 5g黑腐皮壳菌Human RF-IgM(Rheumatoid Factor IgM) ELISA Kit 1g短密篮状菌Human PAX-8(Paired box protein pax-8) ELISA Kit 5g假单胞菌属Human CAMP(Cathelicidin Antimicrobial Peptide) ELISA Kit 25g沙地海源菌Human pro-BDNF(pro Brain Derived Neurotrophic Factor) ELISA Kit 5g酿酒酵母Human ITGA1/CD49a(Integrin alpha-1) ELISA Kit 100mg传染性支气管炎病毒Human NKp44/NCR2(Natural cytotoxicity triggering receptor 2) ELISA Kit 1g莫拉卡他莫拉菌Human NKp46/NCR1(Natural cytotoxicity triggering receptor 1) ELISA Kit 25gPseudomonas Human Cavin 1(Polymerase I and transcript release factor) ELISA Kit 5g黄硬皮马勃Human NKp30/NCR3(Natural cytotoxicity triggering receptor 3) ELISA Kit 25g锗栓孔菌Human INT8(IntegRator complex subunit 8) ELISA Kit 5g围小丛壳Human CAMP(Cathelicidin Antimicrobial Peptide) ELISA Kit 1g东方拟无枝酸菌Human INT6(IntegRator complex subunit 6) ELISA Kit 犬巴贝斯虫LAMP试剂盒说明书麦康凯肉汤 (CM0005)雷公藤甲素1-叔丁氧羰基-4-哌啶乙酸Neurocan 神经粘蛋白抗原 麦康凯琼脂 (CM0007)雷公藤乙素1-叔丁氧羰基-4-哌啶乙酸NF2/merlin(neurofibromatosis type 2) 2型神经纤维瘤抗原 蛋白胨水Peptone Water雷公藤红素Perifosine (KRX-0401)NFATc1 活化T细胞核因子1蛋白 LAB-LEMCO( ) 肉汤 Lab-Lemco Broth雷公藤内酯甲1H-苯并咪唑-5-羧酸phospho-NFKB p65 (pSer536) peptide 磷酸化细胞核因子/磷酸化k基因结合核因子抗原 LAB-LEMCO( ) 琼脂 Lab-Lemco Agar木犀草素1H-苯并咪唑-5-羧酸NF-KapBp50(p50 NF-kappa B;p50NFKB) 细胞核因子50/κ基因结合核因子50抗原 酵母提取物琼脂(CM0019)木犀草苷1H-苯并咪唑-5-羧酸NGN3(neurogenin 3; Neurog3) 神经元素3抗原 牛奶琼脂 (CM0021)没食子酸3-溴-5-甲氧基苯甲酸NGX6 (nasopharyngeal carcinoma/NPC associated gene 6) 鼻咽癌细胞相关基因6(多肽) 巯基醋酸盐培养基(Brewer) (CM0023)蒙花苷3-溴-5-甲氧基苯甲酸NIT2 (nitrilase family, member 2) NIT2蛋白抗原 |