细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

中文名称：5-氟脲嘧啶(5-Fluorouracil)

英文名称：5-Fluorouracil

产品规格：1ml|2ml

产品货号：BJ-01X7027

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

Choanotaenia infundibulum漏斗状带绦虫探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Acetyl-Histone H4(K12)  乙酰化组蛋白H4抗体 规格: 0.1mlRabbit Anti-horse IgM/APC  APC标记的兔抗马IgM 规格: 0.1ml

Herba asari细辛探针法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周PHLDA1/TDAG51  T淋巴细胞凋亡相关蛋白TDAG51抗体 规格: 0.1mlMouse Anti-rabbit IgG/Cy5  Cy5标记的小鼠抗兔IgG 规格: 0.1ml

Guaratuba Virus瓜纳图巴病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Phospho-NMDAR2B (Tyr1070)  磷酸化谷受体2B抗体 规格: 0.1mlMouse Anti-Goat IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350标记的小鼠抗羊IgG 规格: 0.1ml

Trichothecium spp.单端孢霉属通用探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周CRYZL1  醌氧化还原样蛋白1抗体 规格: 0.2mlPAR-2  蛋白激活受体-2抗体 规格: 0.1ml

Streptobacillus moniliformis念珠状链杆染料法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周p22-phox/Cytochrome b245 Light Chain  细胞色素b245轻链抗体 规格: 0.1mlPhospho-HP1(Tyr43)  异染色质蛋白1磷酸化抗体（果蝇） 规格: 1ml

荞麦源性成分PCR试剂盒 种源性检测/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Clathrin heavy chain/Clathrin HC  网格蛋白重链抗体 0.2mlSNX27  SNX27蛋白抗体 规格: 0.2ml

Theileria lowenshuni吕氏泰勒虫LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周HMGCR  三羟基三甲基辅A还原抗体 规格: 0.2mlRabbit Anti-mouse IgM/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350标记的兔抗小鼠IgM 规格: 0.1ml

Soil-borne Cereal Mosaic Virus(SbCMV)土壤传播的禾谷类花叶病毒RT-PCR试剂盒 植物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周BMPER  BMP内皮细胞调节蛋白抗体 规格: 0.2mlCCDC83  卷曲螺旋结构域蛋白83抗体 规格: 0.2ml

Semen astragali complanati沙苑子PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周IgHV/IgH  免疫球蛋白重链可变区抗体 0.2mlphospho-IRS1(Ser312)  磷酸化胰岛素受体底物-1抗体 规格: 0.1ml

Porcine Kobuvirus(PKV)猪嵴病毒(库布病毒)RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周CYP27A1  27α羟化抗体 规格: 0.2mlMLF1 Interacting Protein/PBIP1/KLIP  卡波西氏肉瘤疱疹毒潜伏核抗原相互作用蛋白1抗体 规格: 0.1ml

5-氟脲嘧啶(5-Fluorouracil)PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液（2015药典） 英文名称：Buffered Sodium Chloride – Peptone Solution 产品规格：250g

人电子转移黄素蛋白β肽(ETFB)免疫试剂盒进口、组装

醇发酵管-O157菌生化鉴定 英文名称： 产品规格：20支

人Prominin 2(PROM2)免疫试剂盒进口、分装

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犬N端前心钠肽(NT-ProANP)免疫试剂盒*直销

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鸡髓磷脂碱性蛋白(MBP)免疫试剂盒进口、分装

小鼠白介素1可溶性受体Ⅰ(IL-1sRⅠ)免疫试剂盒进口、组装

大鼠血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2)免疫试剂盒进口、组装

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