操作步骤: 实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。 1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。 3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。 4. 每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。 5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。 6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。 7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。 8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后立即进行检测。 特别提醒:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。 产品名称 | 线粒体苹果酸脱氢酶测试盒100管/96样 | 规格 | 100管/96样 | 检测方法 | 微量法 | 货号 | BJ-01S9774 |
商品介绍: 测定意义: MDH (EC 1.1.1.37)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一,催化苹果酸形成草酰乙酸;相反,胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物, 连接多条重要的代谢途径。因此,MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色,包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性,MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH,细菌中通常只含有NAD-MDH,在真核细胞中,NAD-MDH分布于细胞质和线粒体中。 测定原理: MDHm催化NADH还原草酰乙酸生成苹果酸,导致340nm处光吸收下降。 需自备的仪器和用品: 紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1 mL石英比色皿和蒸馏水。 |
测定步骤: 1、 酶标仪预热30min以上,调节波长至450nm。 2、 试剂三的稀释:将试剂三用蒸馏水稀释50倍,用多少配多少。(试剂三和蒸馏水1:49稀释。 3、 工作液配制:在试剂一加入100μl试剂二,充分混匀。配好的试剂4℃避光可保存一周。(若一次性测定样本较少,可按照实际用量将试剂一和试剂二按照20ml:0.1ml的比例混匀配制) 4、 将一瓶试剂四用5ml蒸馏水溶解(溶解后一周内用完)。 5、 样本测定(在96孔板中依次加入下列试剂) 选择抗凝的注意点: ①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致; ②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固; ③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆); ④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后用于测定。 Haemophilus gallinarum禽嗜血杆LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 致泻性大肠埃希氏五重PCR试剂盒(停) 动物病原微生物检测(科研用) 50次 低温 负20度 一年 4周 Haemophilus influenzae流感嗜血杆LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Clostridium perfringens产气荚膜梭状芽孢杆通用LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Xanthomonas hyacinthi风信子黄腐病PCR试剂盒 植物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Peste Des Petits Ruminants Virus Vaccine Strain (PPRV-Vaccine)小反刍兽疫病毒疫苗株探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用) 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Spica prunellaeLAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Venezuelan Equine Encephalomyelitis Virus(VEEV)委内瑞拉马脑脊髓炎病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Squama manis穿山甲染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Yeast酵母属通用荧光及可视化LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用) 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Herba moslae香薷染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Campylobacter pybridis幽门弯曲杆探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用) 50次 低温 负20度 一年 2-3周 线粒体苹果酸脱氢酶测试盒100管/96样NINHYDRIN蛋白质浓度定量试剂盒 100次 聚乙二醇沉淀法DNA清洁试剂盒 20次 RS培养基(RS琼脂平板) 英文名称:RS Medium 产品规格:100g 酪(TYR)氧化高效液相色谱 (HPLC)分析试剂盒 载玻片细胞CREB蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 10/20次 前列腺肿瘤CAG三联子定量试剂盒 50次 冰冻切片组织ERK蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 10/20次 体液单胺氧化(MAO)总活性化学发光法定量检测试剂盒 20次 品红亚硫酸盐(FUCHSIN SULFITE)原位直接染色试剂盒 石蜡切片组织线粒体复合物III蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 10/20次 组蛋白H3-K56(mono/di)甲基化检测试剂盒 10/20次等 |