测定步骤: 1、 酶标仪预热30min以上,调节波长至450nm。 2、 试剂三的稀释:将试剂三用蒸馏水稀释50倍,用多少配多少。(试剂三和蒸馏水1:49稀释。 3、 工作液配制:在试剂一加入100μl试剂二,充分混匀。配好的试剂4℃避光可保存一周。(若一次性测定样本较少,可按照实际用量将试剂一和试剂二按照20ml:0.1ml的比例混匀配制) 4、 将一瓶试剂四用5ml蒸馏水溶解(溶解后一周内用完)。 5、 样本测定(在96孔板中依次加入下列试剂) 特别提醒:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。 产品名称 | 线粒体柠檬酸测试盒100管/96样 | 规格 | 100管/96样 | 检测方法 | 微量法 | 货号 | BJ-01S9772 |
商品介绍: 测定意义: CA是线粒体三羧酸循环的第一个中间产物,由柠檬酸合酶催化乙酰CoA与草酰乙酸合成,其含量是三羧酸循环强度的主要指标之一。 配合测定丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性、乙酰CoA含量、柠檬酸合酶活性和CA含量,其中(1)丙酮酸含量和丙酮酸脱氢酶活性变化可以反映糖酵解进行程度,(2)综合分析丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性和乙酰CoA含量变化可以反映脂肪酸β-氧化途径提供的乙酰CoA情况,(3)乙酰CoA含量、柠檬酸合酶活性和CA含量变化可以反映三羧酸循环进行状况。 测定原理: CA在柠檬酸裂解酶的作用下,生成α-酮酸(草酰乙酸);在弱酸性条件下,α-酮酸进一步与苯肼反应,生成相应的α-酮酸苯腙;α-酮酸苯腙在330nm处有吸收峰,该波长下吸光度的变化程度可反映出CA的含量。 自备仪器和用品: 可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿、研钵和蒸馏水。 |
选择抗凝的注意点: ①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致; ②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固; ③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆); ④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后用于测定。 操作步骤: 实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。 1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。 3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。 4. 每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。 5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。 6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。 7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。 8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后立即进行检测。 Coenurus cerebralis脑多头囊虫LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Ibaraki Virus牛茨城病病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Rotavirus A轮状病毒A群RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Paracoccus denitrificans脱氮副球探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Flos mume梅花探针法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Koi Herpesvirus(KHV)锦鲤疱疹病毒LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Bursaphelenchus xylophilus松材线虫染料法荧光定量PCR试剂盒 植物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Menangle Virus梅拉哥病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Grass carp reovirus(GCRV)草鱼呼肠孤病毒2型RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Rhizoma alpiniae officinarum高良姜探针法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 虾源性成分LAMP试剂盒 种源性检测/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Clonorchis sinensis中华枝睾吸虫LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 线粒体柠檬酸测试盒100管/96样石蜡切片苏木素染色试剂盒 50次 载玻片细胞RHO 蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 10/20次 石蜡切片组织IGF 蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 10/20次 DICER基因敲除试剂盒 5次 体液尿酸含量直接(TPTZ)比色法定量检测试剂盒 50次 同位素真/酵母细胞蛋白核酸结合凝胶迁移电泳分析试剂盒 20次 冰冻切片糖原高碘酸希尔(PAS)法染色试剂盒 50次 GPDGP(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠) 100微升 检测试剂盒 纯化线粒体氧化应激活性氧(ROS)鲁米诺化学发光法 50次 可溶性包涵体蛋白复性(化学稀释II)试剂盒 20次 |