操作规程 1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时. 2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。 3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。 4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。 7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。 8、结果分析 a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90) 中文名称:碘化丙啶PI染色液(50μg/ml) 英文名称: 产品规格:10ml 产品货号:BJ-01X6684 用途: 流式细胞仪分析细胞凋亡、细胞周期等,主要用于RNA染色。 注意事项: Propidium Iodide简称PI,又称碘化丙啶,分子量为668.40,对人体有刺激性,本试剂中用去离子水溶解。 储存条件:-20℃,避光,6个月 |
细胞培养操作规程: 一.培养基及培养冻存条件准备: 1) 准备F-12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。 2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。 3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。 二. 细胞处理: 1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
细胞培养方法: 1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化; ③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止; ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清; ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基; ⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。 2、细胞复苏: ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。 ②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。 3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种 ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化; ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞; ④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。 2 ug pBI 121 pBI 121 低温运输,-20℃保存 0.156-10 nmol/L 人神经突蛋白1(NRN-1)ELISA试剂盒 5 mg AICAR (AMPK激活剂) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Growth-regulated alpha protein 马铃薯葡萄糖半固体琼脂 Potato Dextrose Semisolid Agar 250g 3.12-200 ng/mL 人Ⅱ型前胶原羧基端肽(PⅡCP)ELISA试剂盒 25 T 超微量ATP测试盒(测Ca2+Mg2+ATPase) Oxidative Stress Detection Kit 常温保存 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Granzyme B 100mL TE Buffer,50X,pH8.0 TE Buffer,50X,pH8.0 常温保存 100g 吸附树脂 XAD7 Amberlite XAD7 常温保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Nebulette 缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR-VP试验用培养基) Methyl Red Voges Proskauer Broth 250g 1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Metallothionein-1A 500mL Krebs-Henseleit Buffered Solution Krebs-Henseleit Buffered Solution 常温保存 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Xaa-Pro dipeptidase NLN培养基 NLN Medium 250g 15.6-1000 pg/mL 人颗粒B(Gzms-B)ELISA试剂盒 100µg T4 噬菌体基因 32 蛋白 T4 Gene 32 Protein -20℃保存 50次 柱式软骨RNAout Colume Cartilage RNAOUT 4℃保存 0.78-50 ng/mL 人受体RXR-β(Retinoic acid receptor RXR-beta)ELISA试剂盒 碘化丙啶PI染色液(50μg/ml)大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)免疫试剂盒进口、分装 兔子血纤蛋白原降解产物(FDP)免疫试剂盒进口、组装 大鼠母亲DPP同源物4(Smad 4)免疫试剂盒现货供应 人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体2(TRAIL-R2/DR5)免疫试剂盒*直销 大鼠白三烯C4(LTC4)免疫试剂盒*直销 人外显肽(extein)免疫试剂盒进口、组装 鱼白介素6(IL-6)免疫试剂盒现货供应 人酰基转移(LCAT)免疫试剂盒进口、分装 T1N0肉汤 英文名称:TIN0 Broth 产品规格:250g 人间变性淋巴瘤激(ALK)免疫试剂盒现货供应 抗生素检定培养基 32 号 英文名称: 产品规格:250g
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