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线粒体绿色荧光探针
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线粒体绿色荧光探针公司正在出售的产品:0.156-10 ng/mL 人双特异性蛋白4(DUSP4)ELISA试剂盒 15.6-1000 pmol/L ELISA Kit for Vitamin B12 0.47-30 ng/mL ELISA Kit for Human Metallothionein-1E 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Dickkopf-re
  线粒体绿色荧光探针的详细资料:

培养操作步骤

1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;

2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);

3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;

4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;

5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 

产品参数:

中文名称

英文名称

产品规格

产品货号

线粒体绿色荧光探针

Mitochondria Tracker Green

50μg

BJ-01X6576

商品详细介绍:

本探针一种线粒体绿色荧光探针,可以用于活细胞线粒体特异性荧光染色。

本探针为采用Molecular Probes公司的carbocyanine进行了荧光标记的一种Mito-Tracker,分子量为671.88,可以用作线粒体特异性的荧光探针。和rhodamine 123或JC-1相比,本探针对于线粒体的染色不依赖于线粒体膜电位。

本探针可以用于对活细胞的染色,但染色后如果固定会导致染色消退。本探针呈绿色荧光,检测时的大激发波长为490nm,大发射波长为516nm。按终工作浓度为20-200nM计算,可以配制约370-3700ml 本探针工作液。

储存条件:-20℃避光,有效期半年。

实验报告:

一、分离与培养:

1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;

2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;

3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;

5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;

二、免疫荧光鉴定:

1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;

2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;

5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;

6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

2.png 

实验要点及说明:

1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;

2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃制造,并经过铬酸洗液处理;

3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;

4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;

5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

操作要点:

1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。

2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内完全解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。

3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。

4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。

5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。

6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

Morganella morganii摩氏摩根LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Influenza Virus A甲型流感()病毒H5N2亚型RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用) 50次 低温 20度 一年 2-4周

杏仁源性成分染料法荧光定量PCR试剂盒 种源性检测/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Cortex moutan牡丹皮LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-4周

Turnip Mosaic Virus(TuMV)大头菜花叶病毒RT-PCR试剂盒 植物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Prevotella intermedia中间普雷沃染料法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Ostertagia orloffi阿洛夫奥斯特线虫LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

骆驼源性成分染料法荧光定量PCR试剂盒 种源性检测/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 1-3天

Elm yellows phytoplasma榆树黄花病植原体PCR试剂盒 植物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Tick-borne Hemorrhagic Fever Virus(TBHFV)蜱传出血热病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Rhizoctonia fragariae草莓花枯病PCR试剂盒 植物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

Human Polyomavirus 6 (HPyV6)人多瘤病毒6 探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周

线粒体绿色荧光探针人抗卵子抗体免疫试剂盒进口、组装

TPY肉汤 英文名称:TPY Broth 产品规格:250g

人钙联蛋白(calnexin)免疫试剂盒进口、分装

液体培养基 英文名称:Liquid medium 产品规格:250g

β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)免疫试剂盒现货供应

猪伪狂犬病毒(PRV)抗体(IgG)免疫试剂盒现货供应

犬三碘甲状腺原(T3)免疫试剂盒进口、组装

小鼠脱氢表雄酮(DHEA)免疫试剂盒进口、组装

猫三碘甲状腺原(T3)免疫试剂盒进口、组装

小鼠低氧诱导因子1α(HIF-1α)免疫试剂盒进口、分装

大鼠孕激素/孕酮(PROG)免疫试剂盒进口、分装

 


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