细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

中文名称：革兰氏菌染色鉴定试剂盒(Brown-Hopp)

英文名称：Brown-Hopp Staining Kit

产品规格：100次

产品货号：BJ-01X6675

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

50T 乙型肝炎病毒cccDNA PCR测定试剂盒  低温运输，-20℃保存 31.2-2000 pg/mL 人钙粘蛋白11( Cadherin-11)ELISA试剂盒

含TSA培养基平板（7cm） Tryptose Soya Agar 10个/包 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Dual specificity protein phosphatase 9

50T 乙型肝炎病毒阿德福韦耐药变异（RT181和RT23位点）PCR测定试剂盒  低温运输，-20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Potassium/sodium hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channel 4

250mL Gelatin Veronal Buffer with Mg++ and Ca++ (GVB++)   Gelatin Veronal Buffer with Mg++ and Ca++ (GVB++)   常温保存卵黄琼脂培养基基础    进口、国产Egg Yolk Agar Base用于肉毒梭菌、产气荚膜梭菌的分离培养（GB标准）250

25KU 多氧化 ( 菌菇 ) Polyphenol Oxidase (Mushroom) -20℃保存 7.8-500 pg/mL. ELISA Kit for Human Cyclin-dependent kinase 4 inhibitor C

100 μL Vinblastine（长春新碱） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 10

2 ug pRSET B pRSET B 低温运输，-20℃保存 12.5-800 pg/mL ELISA Kit for Human Tachykinin-3

100mL Triton X-100 10%(w/v) Triton X-100 10%(w/v) 常温保存聚酯80培养基(需氧、厌氧菌)进口、国产Tween80 Medium(Bacteria)250克油剂的无菌试验

500mL Gelatin Blocking Buffer in PBS   Gelatin Blocking Buffer in PBS   常温保存 1.56-100 ng/mL 人蛋白聚糖4(PRG4)ELISA试剂盒

萘啶酮酸2.25mg  2.25mg/支*5 0.156-10 ng/mL 人催产素(Podocin)ELISA试剂盒

2 ug pLVX-tdTomato-N1 pLVX-tdTomato-N1 低温运输，-20℃保存1% NaC1乳糖发酵管进口、国产1% NaC1乳糖发酵管20支BR

革兰氏菌染色鉴定试剂盒(Brown-Hopp)人聚集蛋白(Agrin)免疫试剂盒进口、分装

哥伦比亚琼脂培养基（2015药典） 英文名称：Columbia Blood Agar Medium 产品规格：250g

人登革热抗体(DF-Ab)免疫试剂盒现货供应

色肉汤 英文名称： 产品规格：20支

人NOD样受体(NLR)免疫试剂盒*直销

猪肝细胞生长因子(HGF)免疫试剂盒*直销

犬25羟基D3(25 HVD3)免疫试剂盒进口、分装

小鼠(Cortisol)免疫试剂盒进口、分装

鸡前列腺素F2α(PGF2α)免疫试剂盒*直销

小鼠阿立新A(Orexin A)免疫试剂盒现货供应

大鼠胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)免疫试剂盒现货供应