产品参数： 中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 产品货号 | 死细胞核7-AAD染料 | 7-amino-actinomycin D | 1mg | BJ-01X6614 |
商品详细介绍： 本产品适用于细胞核酸染色，可应用于荧光显微镜、激光共聚焦计或流式细胞仪检测。7-AAD（7-amino-actinomycin D）是一种核酸染料，它不能通过正常质膜，随着细胞凋亡、细胞死亡过程，质膜对7-AAD的通透性逐渐增加，结合细胞凋亡中DNA的有控降解，在合适波长激发光的激发下可发出明亮的红色荧光，通过7-AAD标记DNA的强弱，将细胞分为三群：7-AAD强为死亡细胞，7-AAD弱是凋亡细胞，7-AAD-为正常活力细胞。7-AAD同PI有着相似的荧光特性，但其发射波谱较PI窄，对其他检测通道的干扰更小，在多色荧光分析中是PI 的佳替代品，可与Annexin V-EGFP/FITC/PE联合使用。 注意事项 1. 7-AAD 避光保存及使用。 2. 7-AAD 为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等。 操作说明 1.超纯水可配制1mg/ml 的7-AAD 储液，避光，2-8℃保存。 2.7-AAD 的工作浓度建议为2ug/ml，可根据实验进行微调优化。 3.荧光显微镜下观察激发波长546nm，发射波长647 nm，7-AAD 荧光信号呈红色。 储存：-20℃,避光，有效期12个月。 |
实验报告： 一、分离与培养： 1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小； 2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置； 3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化； 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养； 5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养； 二、免疫荧光鉴定： 1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min； 2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min； 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜； 5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h； 6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 培养操作步骤 ： 1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中； 5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
 实验要点及说明： 1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理； 3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。 操作要点： 1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。 2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。 3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。 4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。 5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。 6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。 Herba cirsii japonici大蓟LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Semen pharbitidis牵牛子LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Sporothrix schenckii申克孢子细探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 巴西果仁源性成分染料法荧光定量PCR试剂盒 种源性检测/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Influenza Virus C丙型流感病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Equine Herpesvirus 3 (EHV-3)马疱疹病毒3型探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Goose Astrovirus（GAstV）鹅星状病毒PCR试剂盒 定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Ditylenchus angustus水稻茎线虫PCR试剂盒 植物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Squama manis穿山甲PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Bovine Rhinitis B virus (BRBV)牛鼻炎病毒B型RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Tilleiia controversa kuehn小麦矮腥黑穗病PCR试剂盒 植物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Streptobacillus moniliformis念珠状链杆探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 死细胞核7-AAD染料猪瘟抗体(IgG)免疫试剂盒进口、组装 犬肾上腺素(EPI)免疫试剂盒现货供应 小鼠脱氧胶原吡啶交联(DPD)免疫试剂盒现货供应 猫嗜酸粒细胞趋化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)免疫试剂盒现货供应 小鼠凋亡相关因子(FAS/CD95)免疫试剂盒*直销 大鼠载脂蛋白A1(apo-A1)免疫试剂盒*直销 兔子前白蛋白(PA)免疫试剂盒现货供应 大鼠粒细胞集落刺激因子(G-CSF)免疫试剂盒进口、组装 人真胰岛素(TI)免疫试剂盒进口、分装 大鼠癌胚抗原(CEA)免疫试剂盒进口、分装 人糖皮质激素受体α(GR-α)免疫试剂盒现货供应
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