操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

中文名称：拓扑异构酶Ⅱ抑制剂(Etoposide)

英文名称：topoisomeraseⅡ inhibitor

产品规格：1mL(10mM)|100mg|200mg|500mg

产品货号：BJ-01X7112

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

Semen euryales芡实探针法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周DNMBP  动力结合蛋白DNMBP抗体 规格: 0.2mlphospho-Ret/HSCR1(Tyr1062)  磷酸化原基因酪蛋白激受体RET抗体 规格: 0.1ml

Trypanosoma brucei rhodesiense布氏罗得西亚锥虫LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周phospho-Nrf2 (Ser40)  磷酸化核因子2相关因子2(Ser40)抗体 规格: 0.1mlCrk p38 /CRK  Crk p38抗体 规格: 0.2ml

Grass Carp Reovirus(GCRV)草鱼呼肠孤病毒毒通用探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周HPV18 E6  人类状瘤毒18 E6抗体 规格: 0.2mlGPR71/T1R2  蛋白偶联受体71抗体 规格: 0.2ml

Bursaphelenchus xylophilus松材线虫LAMP试剂盒 植物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周MMP-10  基质金属蛋白-10抗体 规格: 0.1mlPhospho-FAK(Tyr861)  磷酸化粘着斑激抗体 规格: 0.1ml

火鸡源性成分LAMP试剂盒 种源性检测/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周phospho-EGFR (Ser1026)  磷酸化表皮生因子受体抗体 规格: 0.1mlCD13/APN/ANPEN  CD13氨肽N抗体 规格: 0.1ml

Calymmatobacterium granulomatis肉芽肿鞘杆探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Donkey Anti-rabbit IgG/Cy7  Cy7标记的驴抗兔IgG 规格: 0.1mlPhospho-IRAK1 (Ser376)  磷酸化白介素-1受体相关激1抗体 规格: 0.1ml

Potato Virus M(PVM)马铃薯病毒M型RT-PCR试剂盒 植物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周GIMAP7  GTPIMAP家族成员7抗体 规格: 0.2mlC2orf68  2号染色体开放阅读框68抗体 规格: 0.2ml

Ganoderma灵芝PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周CCDC70  卷曲螺旋结构域蛋白70抗体 规格: 0.2mlTRIM29/ATDC  共济失调毛细管扩张症D相关蛋白抗体 规格: 0.2ml

Sarcocystis spp.肉孢子虫通用LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周PSGD/HOXB13  同源盒蛋白HOXB13抗体 规格: 0.2mlphospho-HDAC7 (Ser318)  磷酸化组蛋白去乙酰化7抗体 规格: 0.1ml

Streptococcus oralis口腔链球探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Mouse Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647标记的小鼠抗豚鼠IgG 规格: 0.1mlIL-13Ra1  白细胞介素-13受体a1抗体 规格: 0.1ml

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