操作规程 1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时. 2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。 3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。 4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。 6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。 7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。 8、结果分析 a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100 b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90) 中文名称：神经元示踪剂—核黄 英文名称：Nuclear Yellow(Hoechst S769121) 产品规格：10mg 产品货号：BJ-01X6605 分子量：651.01 外观：淡黄色粉末 溶剂：水或者DMSO 光学特性：Excitation = 355 nm; Emission = 495 nm. 储存：-20℃，避光，有效期两年。 Hoechst 系列染料是一类可用于应用于荧光显微镜和流式细胞术分析的标记DNA 的荧光家族染料。因其可以标记DNA，所以这类染料被广泛的应用于细胞核和线粒体的可视化定位。Hoechst33258 和Hoechst33342 作为类二苯甲亚胺的染料，是其中广泛应用的核酸染料。这两种染料都可以被350nm 左右的紫外光激发，发射461nm 左右的蓝紫色荧光。Hoechst 染料可以用于固定或者活细胞染色，也通常被用于另一种核酸染料的替代物，DAPI。他们之间重要的区别在于Hoechst33342 的乙基可以使其更具有亲脂性，因此更易于穿过细胞膜。在一些应用中，Hoechst33258 相比Hoechst33342 表现出较差的膜透性。这类染料也常被用于检测样本DNA 的含量，只需要设置一个荧光强度-DNA 含量之间的标准曲线即可。 本产品是一种长波的核黄染料，通用和退行性示踪标志染料真蓝做神经元的双色标记。在神经元细胞中，核黄优先染色细胞核为黄色荧光，而真蓝作为一种紫外激发光激发的二价阳离子染料可以染色细胞质为蓝色荧光。两种染料在免疫组织化学应用中的表现都非常稳定，可以用于和DAB 染料的联合应用。当Hoechst33258、Hoechst33342 和核黄通过轴突逆行运输到母细胞体后，可能会迁出轴突和母细胞体，因此可以作为毗邻神经胶质细胞细胞核的荧光染料。这种迁出现象在体内和体外的研究中，当您将切片保存于水性环境下，都有发现。使用1%示踪剂时，活体内的迁出现象可以通过限制动物的生存时间而加以控制。体外的迁出现象可以通过材料组织的快速处理来避免。 |
细胞培养操作规程： 一．培养基及培养冻存条件准备： 1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。 2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。 3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 二． 细胞处理： 1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
细胞培养方法： 1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代 ①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次； ②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化； ③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止； ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清； ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基； ⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。 2、细胞复苏： ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。 ②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。 3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种 ①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶） ②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化； ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞； ④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。 Human Papillomavirus 12(HPV-12)人瘤病毒12 LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Radix asteris紫菀PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Taylorella spp.泰勒氏通用探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Radix changii明党参PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Trypanosoma evansi伊氏锥虫LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Streptococcus Suis Type 2 猪链球2型LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Ophiostoma novoulmi新榆枯萎病PCR试剂盒 植物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Swine influenza(SIV)猪流感病毒通用型PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用） 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Porcine Circovirus 3 (PCV-3)猪圆环病毒3型探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 1-2周 Fasciola spp.大片吸虫通用探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Flos campsis凌霄花PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Herba siegesbeckiae豨莶草LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 神经元示踪剂—核黄大鼠丙二醛(MDA)免疫试剂盒进口、组装 人B12(VB12)免疫试剂盒进口、分装 鱼肝细胞生长因子(HGF)免疫试剂盒*直销 人锚蛋白B(Ank-B)免疫试剂盒现货供应 氯化钠B肉汤基础(SCPB) 英文名称：Sodium Chloride Polymyxin Broth Base 产品规格：250g 人结蛋白(Des)免疫试剂盒*直销 抗生素检定培养基5号 英文名称：Antibiotic No.5（PH8.0) 产品规格：250g 人单丝蛋白激1(LIMK1)免疫试剂盒进口、组装 副溶血性弧菌成套生化鉴定管（SN/T0173-2010) 英文名称： 产品规格：16种*1套/盒*5盒 人F-肌动蛋白(F-actin)免疫试剂盒进口、分装 猪补体蛋白4(C4)免疫试剂盒进口、分装
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