操作规程 1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时. 2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。 3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。 4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。 6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。 7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。 8、结果分析 a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100 b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90) 中文名称：快速瑞氏染液 英文名称： 产品规格：250ml×3 产品货号：BJ-01X6589 瑞氏染液主要应用于血液和骨髓涂片染色。 操作步骤 1. (选做)平置血涂片于染色架上，滴加甲醇固定液，室温固定15-30 分钟。 2. 吸去固定液，室温通风晾干。 3. 将试剂一滴加到载玻片上，均匀覆盖住载片上血细胞，染色时间约为1 分钟。等染液有变红的趋势时，迅速滴加两倍试剂一的量的试剂二。继续染色5 到8 分钟。 4. 小股水流洗片，防止将大量的细胞从载片上冲落下来从而影响以后的观察。30s 水洗结束后将载片放到阴凉处风干。 5. 显微镜镜检。 染色结果 1. 红细胞呈浅红色，中央稍淡而略有蝶形态。 2. 白细胞系统清晰易分，细胞膜清晰呈紫黑色，细胞核着色呈深浅不同的紫红色，胞浆中各种颗粒区分明显。其中中性粒细胞浆中颗粒呈淡紫红色，嗜酸粒细胞浆中颗粒呈桔红色、嗜碱性粒细胞胞浆中颗粒呈蓝褐色。单核细胞的胞浆呈灰蓝色，胞浆中颗粒呈细小淡紫红色或蓝紫色。淋巴细胞胞浆呈淡蓝色。 注意事项 1. 推片：取全血3 微升左右置载玻片上，将推玻片保持与载玻片30 度角，置于血滴正前方，稍往后移与血滴接触，即可见血液沿推片下缘散开，再匀速沿载玻片平面向前滑动，至血液铺完血膜为止。 2. 涂片时不要太厚也不要太薄，太厚红细胞重叠并易皱，太薄时不易找到白细胞。 3. 用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。血膜要干透后才能染色，否则染色时血膜易脱落。 4. 试剂一及二染液不能过少，以防很快蒸发引起染液沉淀。试剂一不可少于400 微升，试剂二是试剂一的1 倍量。滴加试剂一及二时要轻摇玻片或用洗耳球对准血片吹气，使染液充分混合。 5. 镜检时如果红细胞偏蓝，请放在蒸馏水中1-3 分钟，直至红润为止。 6. 染色过淡，可复染。染色过深，可用水冲洗或浸泡，还可用75%乙醇脱色3-5 秒。 储存：2～8℃，避光，有效期12个月。 |
细胞培养操作规程： 一．培养基及培养冻存条件准备： 1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。 2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。 3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 二． 细胞处理： 1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。 2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
细胞培养方法： 1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代 ①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次； ②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化； ③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止； ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清； ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基； ⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。 2、细胞复苏： ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。 ②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。 3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种 ①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶） ②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化； ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞； ④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。 Radix stellariae银柴胡PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Boheliridovirus(BIV)饰纹汀蛙虹彩病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Wheat Dwarf Virus(WDV)小麦矮化病毒PCR试剂盒 植物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Brucella bovis牛布鲁氏杆探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Menangle virus曼那角病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Ehrlichiae spp.艾利希体属（埃立克体属）通用LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 1-2周 乳酸杆LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Duck Hepatitis B Virus cccDNA(DHBV cccDNA)鸭乙型肝炎病毒cccDNA 染料法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用） 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Avian Infectious Bronchitis Virus(AIBV)禽传染性支气管炎病毒Mass型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 Radix euphorbiae pekinensis京大戟PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周 Avian Polyomavirus(APV)鸟类多瘤病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 芥末源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 种源性检测/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周 快速瑞氏染液万古0.66mg 英文名称： 产品规格：0.66mg*5 人抗风疹病毒IgM抗体(anti-RV IgM)免疫试剂盒进口、组装 1%葡萄糖肉汤培养基 英文名称：1% Dextrose Broth Medium 产品规格：250g 人多药耐药相关蛋白(MRP)免疫试剂盒进口、分装 1/2MS培养基 英文名称：1/2MS Medium 产品规格：250g 人STEAP家族成员1(Steap1)免疫试剂盒现货供应 猪口蹄疫抗体免疫试剂盒现货供应 犬促肾上皮质激素释放激素(CRH)免疫试剂盒进口、组装 小鼠神经调节蛋白3(NRG3)免疫试剂盒进口、组装 鸡肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体3(TRAIL-R3)免疫试剂盒现货供应 小鼠半乳糖6硫酸酯(Gal-6S)免疫试剂盒进口、分装
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