细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

中文名称：EA36染色液

英文名称：

产品规格：100ml|500ml

产品货号：BJ-01X6709

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

30次 DNA快速连接试剂盒 Rapid DNA Ligation Kit -20℃保存 31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Lactoylglutathione lyase

1000 U 限制性内切PstI Restriction Endonuclease -20℃保存 0.312-20 ng/mL 鲤春病毒(SVCV)核酸检测试剂盒(RT-PCR法)

100g 矮壮素 Chlormequat 室温保存葡萄糖铵培养基　 进口、国产Ammonium Dextrose Medium用于志贺氏菌的葡萄糖铵试验（GB标准）250

2 ug pLVX-EF1α-IRES-mCherry pLVX-EF1α-IRES-mCherry 低温运输，-20℃保存 62.5-4000 pg/mL 人胆囊收缩素/肠促肽(CCK)ELISA试剂盒

50mL RIPA Buffer with Triton, 5X  RIPA Buffer with Triton, 5X  常温保存 6.25-400 pg/mL 人蛋白unc-13 同源物C(UNC13C)ELISA试剂盒

（100IU）和亚碲酸钾（1mg）混合液  1ml*5支/盒 7.8-500 pg/mL 人干扰素α-8(IFN-alpha-8)ELISA试剂盒

1瓶 AAV-293株 AAV-293 低温运输和保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Cocaine- and amphetamine-regulated transcript protein

2 ug pBAD His A pBAD His A 低温运输，-20℃保存 62.5-4000 pg/mL ELISA Kit for Human Keratin, type I cytoskeletal 18

10mg 5- 氟 -5’- 脱氧尿苷 5’dFUrd (5-Fluoro-5’Deoxyuridine)        室温保存 0.156-10 ng/mL 人μ阿片受体(M-OR-1)ELISA试剂盒

1瓶 THLE-3株 THLE-3 低温运输和保存 0.312-20 ng/mL 人整合素α-M(Integrin alpha-M)ELISA试剂盒

250mL Veronal Buffered Saline with EDTA (VBSE)  Veronal Buffered Saline with EDTA (VBSE)  常温保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Platelet endothelial cell adhesion molecule

EA36染色液植物L-抗坏血酸过氧化物2,细胞质(APX2)免疫试剂盒*直销

人难辨梭状芽孢杆菌毒素B(TOXB)免疫试剂盒*直销

冻干兔血浆 英文名称：Freeze dried rabbit plasma 产品规格：0.5ml*10

人抗Scl-70抗体免疫试剂盒进口、组装

改良马丁培养基 英文名称：Martin Broth,Modified 产品规格：250g

人凋亡蛋白激活因子1(APAF1)免疫试剂盒进口、分装

淀粉-双岐杆菌鉴定 英文名称： 产品规格：20支

人P物质受体(SP-R)免疫试剂盒现货供应

猪黄体生成素(LH)免疫试剂盒现货供应

犬P选择素(SELP)免疫试剂盒进口、组装

小鼠羟脯(Hyp)免疫试剂盒进口、组装