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单端孢霉属通用探针法荧光定量PCR试剂盒
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产品型号:
50T
产品报价:
2499
产品特点:
单端孢霉属通用探针法荧光定量PCR试剂盒全新的热启动DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶,可在PCR反应的过程中抑制非特异扩增,从而最大限度地减少非特异性扩增产物的产生,提高荧光定量PCR反应的特异性。
  50T单端孢霉属通用探针法荧光定量PCR试剂盒的详细资料:

实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix (2mM)             
4 μl     引物1(10pM)                 
2 μl     引物2(10pM)                 
2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。
3:结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
PCR实验步骤
典型的PCR由(1)高温变性模板;(2)引物与模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反应组成一个循环,通过多次循环反应,使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是:
将待扩增的模板DNA置高温下(通常为93℃-94℃)使其变性解成单链;
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合,两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短;
耐热的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入,以目的基因为模板从5’→3’方向延伸,合成DNA的新互补链。

储存条件:
仅用于科研14℃或-20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

产品名称

单端孢霉属通用探针法荧光定量PCR试剂盒

英文名称

Trichothecium spp.

货号

BJ-R7311

产品特点:
1. 单端孢霉属通用探针法荧光定量PCR试剂盒使用化学修饰的热启动聚合酶,反应特异性高,*程度地避免了非特异扩增;
2. 反应缓冲液经充分优化,反应灵敏快速,40个循环只需20多分钟;
3. 抗干扰能力强,反应重复性高,适合对土壤、粪便、肿瘤和血液来源的复杂样本中的靶基因进行检测分析。
在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,zui后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
 特异性荧光标记:
 TaqMan法
 TaqMan探针的特性:
(1)5′端标记有报告基团(Reporter, R),如FAM、VIC等
(2)3′端标记有荧光淬灭基团 (Quencher, Q)
(3)探针完整,R所发射的荧光能量被Q基团吸收 ,无荧光, R与Q分开,发荧光
(4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探针
相对定量通过内标定量:
内标(Endogenous Control)通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因,在细胞中的表达量或在基因组中定,受环境因素影响小,内标定量结果代表了样本中所含细胞或基因组数量。
检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。

以下是公司正在热销的产品:

N-BOC-分子式:185.26英文名称:N-BOC- piperidineCAS号:75844-69-8分子量: C10H19NO2

甲巯咪唑英文名称:Methimazole分子式:114.17分子量:C4H6N2SCAS号:60-56-0

丁硫英文名称:Ding Liumi分子式:146.29分子量: C8H18SCAS号:544-40-1

1-二十八烷英文名称:1- twenty-eight alkyl alcohol分子式:410.75952分子量:C28H58OCAS号:67905-27-5

25-羟-原人参三英文名称:25- hydroxy - three alcohol分子式:分子量:CAS号:

性湖兰A英文名称:Acid lake blue A分子式:分子量:CAS号:

性络深绿G英文名称:Acid chrome dark green G分子式:分子量:CAS号:

(R)-1-Boc-3-羟分子式:201.26英文名称:(R) -1-Boc-3- hydroxy piperidineCAS号:143900-43-0分子量: C10H19NO3

1,5-二甲吡唑分子式:英文名称:1,5-二甲吡唑CAS号:分子量:

氢氧1-丁-3-甲咪唑分子式:156.23英文名称:1- butyl -3- methylCAS号:分子量: C8H16N2O

2,6-双(溴甲)萘分子式:314.019英文名称:2,6- bis (Xiu Jiaji) naphthaleneCAS号:4542-77-2分子量: C12H10Br2

单端孢霉属通用探针法荧光定量PCR试剂盒MN-h, 小鼠海马神经元阿舒假囊酵母 Crebrothecium ashbyii

色素瘤关联硫酸软骨素蛋白聚糖(MCSP)重组蛋白英文名称:Recombinant Melanoma Associated Chondroitin Sulfate Proteoglycan (MCSP)

赖氨酸脱羧酶培养基/Lysine Decarboxylase Medium用于细菌赖氨酸脱羧酶试验5克国产/进口

酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae三宝垄霉 Rhizopus semaranzensis

曲霉 Aspergillus niger特异青霉(点青霉) Penicillium notatum

PBS人宫颈细胞

Sf-21(昆虫细胞)5×106cells/瓶×2

大鼠视网膜微血管内皮细胞完全培养基100mL

缓冲蛋白胨水/缓冲蛋白胨水增菌/BPW沙门氏菌前增菌培养和李氏菌前增菌培养250克国产/进口

放线菌肉汤培养基/Actinomycete Broth Medium250克国产/进口

抗生素Ⅷ号培养基/抗生素8号培养基/Antibiotic Agar NO.8去甲万古霉素的效价测定250克国产/进口

 

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