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牛源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒
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产品型号:
50T
产品报价:
2499
产品特点:
牛源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒全新的热启动DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶,可在PCR反应的过程中抑制非特异扩增,从而最大限度地减少非特异性扩增产物的产生,提高荧光定量PCR反应的特异性。
  50T牛源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒的详细资料:

特点:
1. 即开即用,用户只需要提供病毒样品。
2. 根据牛源性成分保守序列设计的专一性引物,与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量 PCR 检测,避免后续污染。
5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6. 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
储存条件:-20℃以下,有效期12个月。

产品名称

牛源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒

英文名称 
货号

BJ-R7417

实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。设立一个专用的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。

使用方法:
一、样品采集:
1、食品样品:样品的采集与预培养按照样品的采集与预培养按照菌检验要求进行。
2、血液样品:用无菌注射器抽取受检者静脉血2mL,注入无菌EDTA2Na(或柠檬酸钠)抗凝管,立即混匀。
3、粪便样品:取粪便置于灭菌的收集管中送检。
4、病灶部位样品:取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。
一、稀释 PCR 阳性对照(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)
1. 注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
2. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡 1 分钟,得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用
6. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
原理:
所谓实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
检测方法
1.SYBRGreenⅠ法:
在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。
SYBR定量PCR扩增荧光曲线图
PCR产物熔解曲线图
2.TaqMan探针法:
探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。

1,2,4,5-四氟分子式:150.07英文名称:Four - 1,2,4,5-CAS号:327-54-8分子量: C6H2F4

3--6-三氟甲吡分子式:172.11英文名称:3- -6- three cyano fluorine methyl pyridineCAS号:216431-85-5分子量: C7H3F3N2

冬凌草甲素英文名称:Oridonin分子式:364.43272分子量:C20H28O6CAS号:28957-04-2

2-羟并咪唑分子式:134.14英文名称:2- 2-hydroxybenzimidazoleCAS号:615-16-7分子量: C7H6N2O

荧光素醋英文名称:Fluorescein acetic acid分子式:593.7分子量: C23H35N9O4S · C2H4CAS号:96087-38-6

2-氯-4-吡甲分子式:143.57英文名称:2- -4- pyridine methanolCAS号:100704-10-7分子量: C6H6ClNO

异英文名称:Azoisobutyronitrile分子式:69.11分子量: C4H7NCAS号:78-82-0

4,4'-二甲-2,2'-联吡分子式:184.24英文名称:4,4'- two methyl -2,2'-CAS号:1134-35-6分子量: C12H12N2

对叶百部碱英文名称:Tuberostemonine分子式:375.5分子量:C22H33NO4CAS号:1818546

1-(4-甲醛)吡唑分子式:172.18英文名称:1- (4- formaldehyde based phenyl)CAS号:99662-34-7分子量: C10H8N2O

4-环氧丙烷氧咔唑分子式:239.27英文名称:4- epoxy propane oxygen carbazoleCAS号:51997-51-4分子量: C15H13NO2

牛源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒球菌属 Lactococcus sp.美味侧耳 Pleurotus sapidus

Molt-4/急性淋巴母细胞白血病细胞株国产gersion

小鼠腺上细胞完全培养基100mL

M-FC肉汤/滤膜粪大肠菌肉汤/M-FC Broth大肠杆菌群的滤膜法检测250克国产/进口

小鼠直肠平滑肌细胞完全培养基UACC-812(人腺导管瘤细胞)

小鼠肠微血管细胞完全培养基100mL

马铃薯葡萄糖琼脂/PDA琼脂/Potato Dextrose Agar霉菌分离培养和霉菌酵母菌计数250克国产/进口

白轮枝孢

AML-193(人急性单核细胞白血病单核细胞)5×106cells/瓶×2

MA, 小鼠星形胶质细胞

NG108-15(小鼠神经细胞瘤与大鼠神经胶质瘤之融合细胞)5×106cells/瓶×2

 

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