实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。

特点：
1. 即开即用，用户只需要提供病毒样品。
2. 根据梅毒螺旋体梅毒亚种保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量 PCR 检测，避免后续污染。
5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6. 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
储存条件：-20℃以下，有效期12个月。

使用方法：
一、样品采集：
1、食品样品：样品的采集与预培养按照样品的采集与预培养按照菌检验要求进行。
2、血液样品：用无菌注射器抽取受检者静脉血2mL，注入无菌EDTA2Na(或柠檬酸钠)抗凝管，立即混匀。
3、粪便样品：取粪便置于灭菌的收集管中送检。
4、病灶部位样品：取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。
一、稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。
2. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用
6. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

原理:
所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
检测方法
1.SYBRGreenⅠ法：
在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加*同步。
SYBR定量PCR扩增荧光曲线图
PCR产物熔解曲线图
2.TaqMan探针法：
探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成*同步。

间乙甲分子式：120.19英文名称：Ethyl toluene：620-14-4分子量： C9H12

1,3,5-三(4-羧)分子式：438.44英文名称：1,3,5- three (4- group) benzene：50446-44-1分子量： C27H18O6

2--4-甲-5-乙酰噻唑分子式：156.21英文名称：2- 4 - 5 -乙酰噻唑甲：30748-47-1分子量： C6H8N2OS

4-甲吡氧物分子式：109.13英文名称：4- methyl pyridine oxide：1003-67-4分子量： C6H7NO

直接红棕M英文名称：Direct red brown M分子式：627.53分子量： C29H19N5Na2O7S：2429-82-5

5-尿嘧分子式：127.1英文名称：5- aminouracil：932-52-5分子量： C4H5N3O2

2--3-溴-5-硝吡分子式：218.01英文名称：2- amino -3- -5-：15862-31-4分子量： C5H4BrN3O2

4,6-二氯-2-三氯甲喹啉分子式：315.41英文名称：4,6- two -2- three：93600-20-5分子量： C10H4Cl5N

2,3-二-5-(4-氯)氯四氮唑分子式：369.25英文名称：2,3- two -5- (4- chlorophenyl phenyl) tetrazolium chloride：10557-51-4分子量： C19H14Cl2N4

氯石蜡分子式：英文名称：Chlorinated paraffin：63449-39-8分子量：

五氯邻二甲分子式：278.39英文名称：Five Cl：2741-57-3分子量： C8H5Cl5

梅毒螺旋体梅毒亚种探针法荧光定量PCR试剂盒Swiss albion小鼠胚胎成纤维细胞英文名称：3T6

大鼠胰岛细胞*培养基豚鼠心肌来源细胞

ITC肉汤/TTC肉汤/氯苯酚替卡西林氯酸肉汤/三氯生替卡西林氯酸肉汤/三氯苯氧氯酚替卡西林氯酸肉汤/ITC Broth分离培养耶尔森氏菌250克国产/进口

HT-1080(人纤维肉瘤细胞)5×106cells/瓶×2

HuH-6(人肝母细胞瘤细胞)5×106cells/瓶×2

察氏培养基 规格： 250g 用途： 用于培养能以硝酸作为氮源的真菌和细菌，及青霉和霉等霉菌的分离培养和形态鉴别

SK-BR-3(人腺细胞)MLF, 小鼠淋巴成纤维细胞

岩藻糖苷酶αL1(FUCα1)重组蛋白英文名称：Recombinant Fucosidase Alpha L1, Tissue (FUCa1)

大鼠气管和支气管上细胞*培养基100mL

IV型胶原酶(含100mL酶解缓冲)10mL

纤溶酶原(Plg)重组蛋白英文名称：Recombinant Plasminogen (Plg)