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苏木素-伊红(H-E)染液
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苏木素-伊红(H-E)染液公司正在出售的产品:250mL MOPS Buffer,1.0M,pH8.5 MOPS Buffer,1.0M,pH8.5 常温保存100uL 植物Actin PCR引物 Common PCR Primer -20℃保存2 ug pAO 815 pAO 815 低温运输,-20℃保存大豆蛋白胨 Peptone from Soybean Meal 250g1瓶 SK
  苏木素-伊红(H-E)染液的详细资料:

中文名称:苏木素-伊红(H-E)染液

英文名称:

产品规格:200ml

产品货号:BJ-01X6597

苏木素—伊红染液(HE)染液主要用于显示各种组织正常成分及病变的一般形态结构,是生物学、组织学、病理学及细胞学等学科的基本的常规染色方法。在病理诊断、教学与科研中广泛应用,具有重要价值。

细胞中的细胞核是由酸性物质组成,它与碱性染料(苏木素)的亲和力较强,而细胞浆则相反,它含有碱性物质与酸性染料(伊红)的亲和力较大。因此,组织切片经HE 染色后,细胞核被苏木素染成蓝色,细胞浆,肌纤维、胶元纤维等染成不同程度的红色,红细胞则呈橙红色。

试剂盒组份:

试剂一:核染液 50ml×1

试剂二:浆染液 50ml×1

试剂三:增色液 50ml×2

产品优点

1. 本染液无毒,环保,对人体无伤害,染液内不含汞,甲醇等有毒试剂,可保护操作人员的健康。

2. 操作简便,核染色与浆染液二步染色,染色清晰。

3. 快速从染色至封片,观察多8-10 分钟。

4. 试剂保存时间长,不易产生沉淀和金属氧化膜。

5. 封片后玻片长期保存。

储存:4℃,有效期12个月。

细胞培养操作规程:

一.培养基及培养冻存条件准备:

1) 准备F-12K培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。

2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。

3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。

二. 细胞处理:

1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。


QQ截图20220509112004.png

细胞培养方法:

1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;

②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;

③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;

⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏:

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。

3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)

②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;

④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

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操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。

8、结果分析

a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(完全培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(完全培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

 


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