细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

中文名称：VEGFR(Flk-1/KDR)抑制剂

英文名称：SU5416

产品规格：1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg

产品货号：BJ-01X7121

细胞培养方法：

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化；

③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

Enterovirus(EV)肠道病毒B组RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Phospho-p63 (Ser395)  磷酸化P63瘤抑制基因抗体 规格: 0.1mlphospho-SCNN1B(Ser633)   磷酸化上皮钠通道β2抗体 规格: 0.1ml

Porcine Circovirus 1 (PCV-1)猪圆环病毒1型探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 1-2周thrombin II  凝Ⅱ(凝因子II)抗体 规格: 0.1mlSMARCA2/BRM  ATP依赖解旋SMARCA2抗体 规格: 0.2ml

Herba cistanches肉苁蓉LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周MFSD12/C19orf28  19号染色体开放阅读框28抗体 规格: 0.2mlphospho-CREB-1(Ser129)  磷酸化CREB-1抗体 规格: 0.1ml

Menangle Virus梅拉哥病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周UQCRC1  辅还原核心蛋白1抗体 规格: 0.2mlTRIM6/RNF89  环指蛋白89 规格: 0.2ml

Taylorella spp.泰勒氏通用探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周MRP8/ABCC11  多药耐药相关蛋白8抗体 规格: 0.2mlFlotillin 1  脂阀结构蛋白1抗体 规格: 0.2ml

Fusarium oxysporum Schlecht. f.sp. cubense香蕉枯萎病PCR试剂盒 植物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Thrombospondin 2  小板反应蛋白2/凝敏蛋白2抗体 规格: 0.2mlLDHD  酸脱D抗体 规格: 0.2ml

Fructus tsaoko草果PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周PCDHGB4  原钙粘蛋白γB4抗体 规格: 0.2mlEphrin A2/LERK6  Ephrin A2抗体 规格: 0.2ml

Pseudomonas mallei鼻疽假单胞LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Goat Anti-Guinea pig IgG/RBITC  罗丹明标记的羊抗豚鼠IgG 规格: 0.3mlPAI-1  纤溶原激活物抑制因子抗体 规格: 0.1ml

Xenohaliotis californiensis加州立克次体探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周phospho-c-Raf (Ser289)  磷酸化原基因c-Raf抗体 规格: 0.1mlMS4A3/CD20L  CD20样蛋白抗体（造干细胞4跨膜蛋白3） 规格: 0.2ml

Semen armeniacae amarum苦杏仁染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周IGSF10  免疫球蛋白超家族成员10抗体 规格: 0.2mlHSP90 β  热休克蛋白90β 抗体 规格: 0.2ml

VEGFR(Flk-1/KDR)抑制剂大鼠胃泌素(Gastrin)免疫试剂盒进口、组装

兔尿激型纤溶原激活物(uPA)免疫试剂盒*直销

大鼠固醇调节元件结合蛋白1C(SREBP-1C)免疫试剂盒进口、分装

人血吸虫抗体(IgM)免疫试剂盒现货供应

大鼠17-α17-αMT)免疫试剂盒现货供应

人热休克蛋白90kDaβ(GRP94),成员1(HSP90B1)免疫试剂盒*直销

MFC琼脂 英文名称：MFC Agar 产品规格：250g

人抗乳头状瘤病毒17型(HPV17)抗体(IgG)免疫试剂盒进口、组装

MRS琼脂 英文名称：MRS Agar 产品规格：250g

人肝素辅因子Ⅱ(HCⅡ)免疫试剂盒进口、分装

PEA琼脂 英文名称：HB7035 产品规格：250g