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神经HRP示踪显色液(DAB法)
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神经HRP示踪显色液(DAB法)公司正在出售的产品:10次 一管式双链cDNA合成试剂盒 One-Tube ds cDNA Synthesis Kit -20℃保存2 ug pLVPT-tTR-KRAB pLVPT-tTR-KRAB 低温运输,-20℃保存水稻赤霉菌培养基 250g1瓶 NCI-N87 [N87]细胞株 NCI-N87 [N87] 低温运输和保存6.5%NaCl葡萄糖琼脂 6.5
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神经HRP示踪显色液(DAB法)


50T

BJ-01X6874

商品详细介绍:

用途:

神经HRP示踪DAB(四甲基联)显色。

注意事项:

主要由DAB孵育液、、乙酸钠缓冲液等组成,染色后呈棕色。

储存条件:-20℃,避光,12个月

实验报告:

一、分离与培养:

1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;

2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;

3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;

5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;

二、免疫荧光鉴定:

1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;

2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;

5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;

6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

培养操作步骤

1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;

2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);

3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;

4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;

5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。 
2.png

实验要点及说明:

1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;

2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理;

3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;

4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;

5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

操作要点:

1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。

2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。

3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。

4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。

5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。

6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

Trypanosoma brucei brucei布氏布氏锥虫探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周GDN/SERPINE2  胶质源性连接蛋白抗体 规格: 0.2mlGPBB/PYGB  脑糖原磷酸化抗体 规格: 0.2ml

Semen coicis薏苡仁LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-4周FBXL5  FBXL5蛋白抗体 规格: 0.2mlARSA  芳香基硫酸酯1抗体 规格: 0.2ml

Feline Leukemia Virus(FeLV)猫白血病病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周RNASE4/Angiogenin  管生成素核糖核酸4抗体(肌萎性侧索硬化症蛋白) 规格: 0.1mlBcl2A1  BCL2相关蛋白A1抗体 规格: 0.1ml

Eurytrema coelomaticum腔阔盘吸虫探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周DR3/APO3/TWEAK  死亡受体3抗体 规格: 0.1mlArfaptin 2  ADP核糖基化因子结合蛋白2抗体 规格: 0.2ml

Tamiami virus(TAMV)太米阿米病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周ADAM11  去整合素样金属蛋白11抗体 0.2mlPAK1  p21激活激1抗体 规格: 0.1ml

Pericarpium citri reticulatae陈皮LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-4周Phospho-DARPP32(Thr34)  磷酸化多巴胺/cAMP调节神经磷蛋白抗体 规格: 0.1mlIKAROS  锌指蛋白IKAROS抗体 规格: 0.2ml

Ross River Virus(RRV)罗斯河病毒RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周Aurora A/ARK-1/AURKA  有丝分裂激A抗体 规格: 0.1mlKAT2B/ GCN5/PCAF  组蛋白乙酰转移PCAF抗体 规格: 0.1ml

Escherichia spp.埃希氏属通用探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周CK8  细胞角蛋白8抗体 规格: 0.1mlMAGEF1  黑色素瘤抗原F蛋白家族1抗体 规格: 0.2ml

Buffalo Pox Virus(BPXV)水牛正痘病毒染料法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周MYH9  肌球蛋白重链9抗体 规格: 0.2mlSA2  粘结蛋白SA2抗体 规格: 0.2ml

Pathogenic Escherichia coli致病性大肠杆(致病性大肠埃希氏)同致泻性大肠杆,编号39500 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 20度 一年 2-3周phospho-PKC delta (Thr505)  磷酸化蛋白激C亚性D型抗体 规格: 0.1mlCCL20/MIP3 alpha  巨噬细胞性蛋白MIP-3a抗体 规格: 0.1ml

神经HRP示踪显色液(DAB法)兔游离睾酮(F-TESTO)免疫试剂盒现货供应

大鼠活性氧调制因子1(ROMO1)免疫试剂盒进口、组装

人胰岛素降解(IDE)免疫试剂盒进口、分装

大鼠ADM2(ADM2)免疫试剂盒进口、分装

人沙眼衣原体抗体(CT)IgG 免疫试剂盒现货供应

MPC琼脂培养基 英文名称:MPC Agar Medium 产品规格:250g

人抗血小板抗体(anti-PA Ab)免疫试剂盒*直销

TSN琼脂 英文名称:TSN Agar 产品规格:250g

人谷脱羧自身抗体IgG(GAD-Ab-IgG)免疫试剂盒进口、组装

L型细菌高渗盐增菌培养基 英文名称:L-Bacterial Hypertonic Salt Broth 产品规格:250g

人白介素1受体相关激-4(IRAK-4)免疫试剂盒进口、分装

 


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