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辅酶ⅡNADP测试盒100管/48样
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辅酶ⅡNADP测试盒100管/48样公司正在出售的产品:78-5000 pg/mL 转基因植物Bt基因核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Keratin, type I cytoskeletal 19 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Serotonin N-acetyltransferase
  辅酶ⅡNADP测试盒100管/48样的详细资料:

特别提醒:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。 

产品名称

辅酶ⅡNADP测试盒100管/48样

规格

100管/48样

检测方法

微量法

货号

BJ-01S9538

11.png 

 

 

商品介绍:

测定意义:

辅酶ⅡNADP(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NADP+和NADPH含量测定可以计算NADP(NADPH + NADP+ )含量和NADPH/NADP+比值,其变化与磷酸戊糖途径和生物合成以及抗氧化反应密切相关。NADPH/NADP+比值不仅是细胞氧化还原态的主要标志之一,而且在PPP途径、生物合成和抗氧化代谢中具有重要调控作用。

测定原理

分别用酸性和碱性提取液提取样品中NADP+和NADPH。NADPH通过PMS的递氢作用,使氧化型噻唑蓝(MTT)还原为甲瓒,570nm下检测吸光值,从而测定NADPH含量。利用6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原NADP+为NADPH,从而检测NADP+含量。

所需的仪器和用品

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

测定步骤:

1、 酶标仪预热30min以上,调节波长至450nm。

2、 试剂三的稀释:将试剂三用蒸馏水稀释50倍,用多少配多少。(试剂三和蒸馏水1:49稀释。

3、 工作液配制:在试剂一加入100μl试剂二,充分混匀。配好的试剂4℃避光可保存一周。(若一次性测定样本较少,可按照实际用量将试剂一和试剂二按照20ml:0.1ml的比例混匀配制)

4、 将一瓶试剂四用5ml蒸馏水溶解(溶解后一周内用完)。

5、 样本测定(在96孔板中依次加入下列试剂)

选择抗凝的注意点:

①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;

②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;

③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);

④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后用于测定。

操作步骤:

实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.        加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。

2.        弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。

3.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

4.        每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。

7.       依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.       用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后立即进行检测。

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