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线粒体活性氧产生速率测试盒100管/96样
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线粒体活性氧产生速率测试盒100管/96样公司正在出售的产品:0.156-10 ng/mL 人丝裂原激活的蛋白激/MAP激(MAPK)ELISA试剂盒 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Biopterin 0.156-10 ng/mL 人髓过氧化物(MPO)ELISA试剂盒 1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Breast cancer
  线粒体活性氧产生速率测试盒100管/96样的详细资料:

注意事项:

1、试剂二为酶,不可冷冻,使用时在冰上放置。

2、对照管只需要做一管。

3、若对照管吸光值大于2,建议将试剂二用蒸馏水稀释7倍后使用(10μl试剂二原液+60μl蒸馏水)。

4、SOD为什么有的样本测定管大于对照管,对照管数值在什么范围?

对照管的范围是0.8-2。对照管吸光值过低可能是(1)试剂二或试剂四没有现配现用;(2)没有按顺序加试剂;(3)反应时间不够,可以延长反应时间(反应时间30min可以延长到40min)。对照管吸光值过高可能是试剂二未按操作说明书稀释相应倍数。

若出现测定管大于对照管,可能是样本中杂质的影响太大,为了降低杂质的影响一般将样本提取上清液用蒸馏水或提取液稀释10倍后再测,通常可以使测定正常。计算公式中乘以相应稀释倍数。

产品属性:

产品名称:线粒体活性氧产生速率测试盒100管/96样

检测方法:荧光法

产品分类:氧化与抗氧化系列

产品规格: 100管/96样

检测方法:荧光法

产品货号:BJ-01S9599

商品介绍:

测定意义:

活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、过氧化氢、及其下游产物过氧化物和羟化物等,研究表明,机体95%以上的活性氧(ROS)都来自于线粒体,其失衡所致的氧化应激与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程有关。

正常情况下,细胞内抗氧化防御系统与氧自由基处于平衡状态,细胞内活性氧(ROS)水平维持在较低的生理范围;在病理情况下,细胞内抗氧化系统与氧自由基的平衡被打破,细胞内活性氧水平过多,就可破坏线粒体酶类、脂类和核酸,使机体出现氧化应激,同时,活性氧还可攻击线粒体DNA产生氧化损伤,导致线粒体ATP合成减少、线粒体膜电位破坏等结构和功能变化。

因此,通过检测活性氧的变化来判断线粒体的功能是否正常具有重要意义。

测定原理:

荧光探针-还原型二氯荧光素 (2', 7'-dichlorodihy drofluorescin diacetate, DCFH-DA)可扩散通过线粒体膜,在线粒体内被酯酶水解,形成无荧光的DCFH,DCFH迅速与ROS反应生成荧光物—氧化型二氯荧光素(2', 7'-dichlo rofluorescin, DCF)。 根据上述原理设计了利用荧光法直接定量检测线粒体ROS产生速率的方法。将荧光强度随时间变化的数据点拟合,线性回归直线斜率与ROS产生的速率呈正比。

需自备的仪器和用品:

多功能酶标仪、恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水。

图片1.png 

所需的仪器和用品:

可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、低温离心机、移液器、研钵、冰和蒸馏水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的测定:

建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验

样本和试剂浪费!

1、样本制备

组织样本:

取约 0.1g 组织(水分充足的样本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4ºC 或冰浴进行

匀浆(或使用各类常见匀浆器)4ºC×12000rpm 离心 10min,取上清作为待测液。

【注】:若增加样本量,可按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取

 

细菌/细胞样本:

先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL

提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);

12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(10

4):提取液(mL)为 500~1000:1 的比例进行提取。 ③ 液体样本:直接检测;若浑浊,离心后取上清检测。
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定量检测试剂盒  

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酵母SD-LEU/TRP培养基  100毫升

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